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目的:研究BCL10对细胞增殖、迁移、侵袭等的影响,初步阐明BCL10在胃癌细胞中发挥促癌作用,为设计胃癌的防治策略提供理论实验依据。方法:qRT-PCR和Western blot检测永生化人胃粘膜上皮细胞(GES-1细胞株)与胃癌细胞(SGC7901、BGC823、MGC803细胞株)中的BCL10的表达情况。通过细胞转染技术,将高表达BCL10的慢病毒和BCL10敲低的慢病毒载体分别转染MGC803、SGC7901细胞,用嘌呤霉素加压筛后构建稳定高表达BCL10的MGC803细胞株和敲低BCL10的SGC7901细胞株,Western blot分别检验转染是否成功。CCK-8增殖检测实验、划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验以及流式细胞术等观察BCL10敲低及高表达对胃癌细胞生物学特性的影响。结果:1.qRT-PCR和Western blot检测人永生化胃粘膜上皮细胞与胃癌细胞中的BCL10的表达情况。qRT-PCR结果显示:相对于GES-1细胞株,BCL10在胃癌SGC7901细胞中显著高表达(P<0.05),而在MGC803和BGC823细胞中的表达无明显改变;Western blot结果发现:与GES-1细胞比较,BCL10在胃癌SGC7901及BGC823细胞中高表达(P<0.05),而在MGC803细胞中低表达(P<0.05)。2.构建稳定高表达BCL10的MGC803细胞株。将高表达BCL10的慢病毒载体HBLV-h-BCL10-3xflag-GFP-PURO及空载体HBLV-GFP-PURO转染MGC803细胞,24h后在荧光显微镜下观察,发现表达GFP荧光细胞的数量约占总细胞数的90%左右。48h后添加嘌呤霉素加压筛选三代后提取细胞总蛋白用于检测BCL10的表达量。Western blot结果显示,转染高表达BCL10载体的MGC803细胞中BCL10蛋白表达水平与未转染组及空载体组细胞比较明显上升(P<0.05),表明稳定高表达BCL10的MGC803细胞株构建成功。3.高表达BCL10对MGC803细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡及细胞周期的影响CCK-8实验显示,稳定高表达BCL10的MGC803细胞在24h、48h、72h三个时间段的OD值(450nm)较未转染组和空载体组大(P<0.05),提示细胞的增殖能力增强。划痕实验显示,高表达BCL10后MGC803细胞在24h、48h细胞的迁移能力均强于未转染组及空载体组细胞(P<0.05)。Transwell迁移和侵袭实验同样发现,高表达BCL10后,MGC803细胞的迁移、侵袭能力增加(P<0.05)。流式细胞术检测结果表明,稳定高表达BCL10细胞株的G0/G1期细胞百分比明显低于未转染组和空载体组,而S期和G2/M期细胞百分比则高于未转染组和空载体组,提示高表达BCL10有促进细胞增殖的作用(P<0.05);流式细胞术检测细胞凋亡结果提示:与未转染组及空载体组对比,高表达BCL10可抑制细胞凋亡(P<0.05)。4.构建稳定敲低BCL10的SGC7901细胞株。荧光显微镜下观察发现,转染敲低BCL10的慢病毒载体24h后带GFP荧光细胞的数量约占总细胞数的90%左右。48h后添加嘌呤霉素加压筛选三代后提取细胞总蛋白用于检测BCL10的表达量。Western blot结果表明,敲低BCL10细胞中BCL10蛋白表达水平明显低于未转染组及空载体组(P<0.05),提示稳定敲低BCL10细胞株构建成功。SGC7901/HBLV-h-BCL10 shRNA3-GFP-PURO细胞抑制BCL10表达的效果最佳,故此选择该组细胞用于后续实验操作。5.敲低BCL10对SGC7901细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响CCK-8实验显示,敲低BCL10细胞在24h、48h、72h三个时间段里的OD值(450nm)较未转染组和空载体组减少,提示细胞的增殖能力减弱(P<0.05);划痕实验结果发现,敲低BCL10 24h、48h、72h后SGC7901细胞的迁移距离均较未转染组及空载体组明显降低(P<0.05);Transwell迁移和侵袭实验结果提示,与未转染组和空载体组比较,敲低BCL10细胞的迁移、侵袭能力大大减弱(P<0.05);流式细胞术分析表明,敲低BCL10组细胞凋亡数量比未转染组和空载体组明显增加(P<0.05)。结论:BCL10可促进胃癌细胞增殖、迁移与侵袭并抑制细胞凋亡。