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肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员通过结合相应的肿瘤坏死因子受体(TNF-R)参与调节细胞凋亡，细胞增殖和炎症等过程，在免疫调节中具有非常重要的作用。CD40属于TNF-R超家族重要的成员之一，通过内源免疫共沉淀的方法纯化了B淋巴细胞中的CD40复合体，然后进行质谱分析寻找复合体中未知的组成蛋白。发现B淋巴细胞很难转染，鉴于CD40与TNF-R1具有很高的同源性，相似的调控蛋白和下游信号通路，因此用siRNA干扰的方法在Hela细胞中鉴定质谱得到的蛋白是否参与调控TNF-R1信号通路。敲低目标蛋白，通过Western Blot和Q-PCR鉴定是否影响TNF-R1下游信号通路，通过免疫共沉淀鉴定是否影响TNF-R1复合体Ⅰ的形成，通过Hochest染色鉴定是否影响细胞凋亡。通过筛选发现了RCHY1和CRBN两个有趣的蛋白。 E3泛素连接酶RCHY1具有催化底物蛋白发生K48位泛素化的功能。发现缺失RCHY1可以显著提高TNFα诱导的NF-κB激活。在Rchy1-/-细胞中，TRADD的蛋白水平显著升高，因此增加了TNF-R1复合体Ⅰ的形成。尽管体内和体外实验显示，RCHY1可以促进TRADD发生K48位泛素化修饰，但是RCHY1并不能降解TRADD。而且，异位表达RCHY1并不能抑制Rchy1-/-细胞中TNFα诱导的过度激活的NF-κB，并且TRADD的蛋白水平也没有变化。所以，RCHY1抑制TNFα诱导的NF-κB激活的具体机制仍然需要继续深入研究。 发现RCHY1不仅可以参加调控TNFα信号通路，而且缺失RCHY1会促进LPS和poly(I∶C)诱导的NF-κB激活。在Rchy1-/-MEF细胞和BMDMs中，TLR4和TLR3介导的JNK和NF-κB信号通路激活显著增强。RCHY1可以与TRAF6动态结合，通过抑制TRAF6的K63位泛素化修饰而降低NF-κB的激活。在LPS刺激下，RCHY1的mRNA水平显著降低。而且，数据库搜索结果显示，沙门氏菌和RNA单链病毒也会降低RCHY1的mRNA水平。在DSS诱导的肠炎模型中，Rchy1-/-小鼠更敏感。所以推测，当病原体感染后，宿主细胞下调RCHY1的表达，从而提高TLR3/4介导的NF-κB和JNK激活，促进炎症因子的表达，帮助机体抵御病原体的入侵。 E3泛素连接酶CRBN可以催化底物蛋白发生K48位泛素化修饰。在MEF细胞中缺失CRBN显著降低TNFα和LPS诱导的NF-κB的激活，而在巨噬细胞中缺失CRBN显著提高LPS诱导的NF-κB的激活。Crbn-/-小鼠对DSS诱导的肠炎及肠癌更敏感。猜测肠道表皮细胞中缺失CRBN可能会导致NF-κB激活下降，而巨噬细胞中缺失CRBN导致NF-κB激活升高，两者共同帮助小鼠抵御肠炎和炎症性肠癌的发生。 除了以上新的调控蛋白，还发现了TNF-R1复合体Ⅰ中已知的组成蛋白cIAP2参与调控TNF-R1复合体Ⅱ介导的细胞凋亡的新机制。cIAP2能与FADD相互作用，并且这种相互作用是TNF-R1复合体Ⅱ的形成和其细胞凋亡所必须的。小鼠缺失cIAP2可以减轻TNFα和D-GalN诱导的急性肝损伤。因此，cIAP2通过调节TNF-R1复合体Ⅱ的形成促进TNFα诱导的细胞凋亡。