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目的:氟是地球上广泛存在且人体必需的一种微量元素,与我们日常生活息息相关。随着研究的深入,氟对生殖系统等非骨相器官损害已日益受到人们关注。本研究旨在探讨活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)介导的自噬在氟化钠(sodium fluoride,NaF)致卵巢凋亡中的作用,为氟化物生殖毒性的进一步研究提供思路。方法:40只初断乳SD雌鼠,适应饲养一周后随机分为四组(对照组,10 mg/L NaF染毒组,50 mg/L NaF染毒组,100 mg/L NaF染毒组),每组各10只。自由饮水染毒六个月后,采集卵巢组织。HE染色观察大鼠卵巢组织形态,TUNEL法检测SD大鼠卵巢组织总体凋亡水平,Western blot检测SD大鼠卵巢组织LC3和P62表达水平,免疫组化法检测卵巢组织caspase3和LC3的蛋白表达水平。体外原代培养大鼠卵巢颗粒细胞,经不同浓度NaF(对照组,0.2 mM,0.4 mM,0.6 mM)染毒24 h后,流式细胞术检测卵巢颗粒细胞内ROS表达水平,Western blot检测不同剂量NaF对卵巢颗粒细胞内自噬与凋亡相关蛋白的表达水平的影响。同时,用自噬抑制剂渥曼青霉素(wortmannin)和ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)联合NaF对大鼠卵巢颗粒细胞进行染毒,24 h后Western blot检测自噬与凋亡相关蛋白表达水平。结果:与对照组比,NaF染毒组大鼠卵巢脏器系数无统计学差异(P>0.05)但HE染色发现,100 mg/L NaF染毒组卵泡数量减少且多闭锁,卵泡膜变薄或破损,颗粒细胞排列错乱,数量减少,细胞核萎缩或不规则,以及TUNEL显示,100 mg/L NaF染毒组凋亡水平明显增强。Western blot结果显示,与对照组比,100 mg/LNaF染毒组LC3-II和P62蛋白表达水平显著升高,有统计学意义(P<0.05),而10 mg/L和50 mg/L NaF染毒组差异不明显(P>0.05),提示NaF不仅可导致卵巢组织损伤,而且还可诱导卵巢组织自噬体蓄积和凋亡。体外原代培养的大鼠卵巢颗粒细胞NaF染毒结果显示,与对照组比,随着NaF染毒浓度的升高,ROS水平逐渐升高,且0.6 mM NaF染毒组ROS水平有显著性升高(P<0.05);0.6 mM NaF染毒组自噬与凋亡相关蛋白表达水平显著性升高(P<0.05),但0.2 mM和0.4 mM NaF染毒组自噬与凋亡相关蛋白表达差异不明显(P>0.05)。与单独NaF染毒组比,NaF+渥曼青霉素联合组颗粒细胞的自噬与凋亡相关蛋白表达水平显著降低(P<0.05),NaF+NAC联合组自噬与凋亡相关蛋白表达水平也显著降低(P<0.05)。提示NaF不仅可诱导卵巢组织凋亡,还可导致自噬体降解受阻,致使自噬体蓄积。NaF导致颗粒细胞的自噬由ROS介导,ROS介导的自噬参与了NaF致大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡。结论:NaF可引起卵巢组织ROS升高,致使卵巢组织发生凋亡和自噬体的蓄积,导致卵巢组织损伤。NaF致颗粒细胞的自噬由ROS介导,ROS介导的自噬参与了NaF致大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡。