甜菊糖苷是一类从甜叶菊中提取的非营养性、非发酵性高倍甜味剂。它具备天然无毒、低热高甜、性质稳定等优点,是一种在食品行业具有广阔发展前景的理想甜味剂。溶剂浸提是目前商业甜菊糖提取的主要工艺,该工艺最后经过结晶回收高纯度莱鲍迪苷A(RA)和甜菊苷(ST)之后,剩余母液通常经过喷干后成为粉末固体,称为母液糖(MLS),一般作为低价甜味剂销售。母液糖中含有60%的甜菊糖苷和一些残余的多酚、黄酮类杂质,这些杂质的存在不仅加重母液糖后苦味,而且影响糖苷的进一步回收。我国每年约产生2000 t母液糖,如果能够通过除杂使其纯度达到85%以上,价格可以提高2~3倍,本文针对上述问题,目标为建立一种操作简单、可工业化的从母液糖中回收甜菊糖苷的方法。此外,自甜菊糖苷酶法转化产物被批准使用后,甜菊糖苷的酶法修饰得到了广泛关注,尤其是比RA分别多一个和两个葡萄糖基的莱鲍迪苷D(RD)和莱鲍迪苷M(RM),它们具有更加优良的甜味性质,因此本文也尝试采用商业酶对RA进行酶法改性。首先,采用树脂法对母液糖进行纯化。优选非极性大孔树脂NDR-1作为吸附基质,静态吸附与解吸的研究结果表明,在25%(v/v)的乙醇溶液中,在pH 7.00、10~oC的条件下进行吸附,在30~oC、100%乙醇不调节pH的情况下等体积解吸,糖苷吸附率为92.24%,解吸率86.61%,杂质含量由母液糖中的34.13%降低至解吸液中的12.88%。基于静态吸附解吸的优化乙醇浓度,经过NDR-1树脂的动态层析(层析柱:1.1×100 cm),母液糖的杂质含量降低至4.78%,糖苷回收率为89.88%。进一步采用10×100 cm的玻璃层析柱处理300 g(干重)母液糖,杂质含量降低至13.79%,糖苷回收率为90.00%,验证了该方法的工业可行性。其次,采用甲醇重结晶母液糖结合树脂柱层析实现母液糖除杂。发现100%(v/v)甲醇对母液糖进行重结晶可以有效除杂,且不同结晶条件下可以得到不同糖苷组成的晶体,重结晶工艺优化结果显示:在料液比1:5,温度25~oC,搅拌时间24 h的条件下得到的晶体中杂质含量最低,为3.11%,结晶率为42.45%。对剩余母液采用大孔树脂NDR-1处理,在优化条件下(吸附溶剂为35%乙醇,原料树脂质量比1:10)进行动态层析(层析柱规格:1.1×100 cm),得到纯度为98.10%的甜菊糖苷,回收率为95.20%。将重结晶法和柱层析法联合用于母液糖的除杂中试,通过处理300 g(干重)母液糖,最终母液糖中甜菊糖苷的回收率达到94.18%,所得糖苷中杂质含量为2.83%。(经过层析处理后杂质含量为1.92%)。最后,以RA为受体,筛选转糖基酶和供体底物的结果表明,转化效率最高的酶和供体底物分别是纤维素酶(Trichoderma reesei)和纤维二糖,经条件优化(RA 10 g/L,纤维二糖100 g/L,酶浓度为2000 U/mL,温度70~oC,pH 3.97),得到RA转化率最高为36.05%,转化产物的味质得到了一定的改善。以纤维二糖为供体底物,RA经纤维素酶转化的产物分析结果显示,其主要的5种转糖基产物为单葡萄糖基-RA的同分异构体。