目的:研究膝痹膏的制备工艺,建立其质量标准,并进行初步稳定性及皮肤安全性评价研究。方法:(1)采用水蒸气蒸馏法,以处方中药材挥发油提取率为指标,通过单因素实验优选挥发油最佳提取工艺。(2)以阿魏酸、藁本内酯、秋水仙碱的含量及浸膏得率为评价指标,以溶剂倍数、提取时间、乙醇体积分数为主要影响因素,采用星点设计-效应面法优选膝痹膏提取工艺的最佳条件。(3)采用单因素实验,研究软膏剂外观,涂展性,离心、耐寒耐热稳定性对综合评价的影响,筛选最佳成型工艺。(4)采用薄层色谱法对膝痹膏处方中当归、秋水仙、白芷、细辛、干姜等药材分别进行定性鉴别,用高效液相色谱法对膝痹膏中阿魏酸、藁本内酯及秋水仙碱的含量进行测定,并制定其质量标准。(5)参照2015版《中国药典》软膏剂项下相关规定,初步研究膝痹膏的稳定性,选取膝痹膏三批样品在高温、高湿极端条件下及加速试验条件下,观察其性状、鉴别和含量测定等结果有无明显变化。(6)以兔、豚鼠为模型进行动物实验,分别观察膝痹膏对家兔完整皮肤组和破损皮肤组的刺激反应,并进行豚鼠的皮肤过敏反应实验。(7)以豚鼠为动物实验模型研究膝痹膏的皮肤补水及保湿效果。结果:(1)膝痹膏中挥发油最佳提取工艺为将药材浸泡2h,加12倍量的水提取6h。(2)最佳醇提工艺为加11倍55%的乙醇回流提取两次。(3)最佳成型工艺为空白基质(凡士林:羊毛脂=2:1)与药膏比例为1:1。(4)建立了制剂中当归、秋水仙、白芷、细辛、干姜的薄层色谱鉴别方法,采用高效液相色谱法建立了制剂中阿魏酸、藁本内酯及秋水仙碱的含量测定方法。当归色谱条件为色谱柱(Diamonsil C18(2)4.6mm×250 mm,5μm),流动相B为乙腈,流动相A为0.1%磷酸水溶液,采用梯度洗脱程序,随时间调整流动相B中的体积百分数:0~15min,5%~35%B;15~30min,35%~70%B;30~40min,70%~95%B。流速1mL/min,柱温30℃,进样量10μL,检测波长325nm。秋水仙碱的色谱条件为色谱柱(Diamonsil C18(2)4.6mm×250 mm,5μm),流动相:甲醇-水(45:55),检测波长353nm,流速1mL/min,柱温40℃,进样量10μL。(5)三批样品在在高温高湿极端条件下,性状、鉴别无变化,样品含量出现下降情况,加速试验条件6个月内,其性状、鉴别和含量测定等结果与0月相比无明显变化,表明膝痹膏在稳定性考察期间稳定性良好。(6)膝痹膏外用对兔的完整或破损皮肤均无刺激性。并且外用后未出现红肿、水肿等过敏现象。(7)膝痹膏的最佳给药间隔时间为4小时,且膝痹膏具有一定补水及保湿效果。结论:膝痹膏生产工艺合理、可行。制定的质量标准简便、快速、准确,可以较为有效的监控制剂质量,具有一定指导意义。稳定性实验结果表明,膝痹膏具有良好的稳定性,适宜在阴凉干燥处放置。膝痹膏皮肤安全性评价实验研究表明,膝痹膏是一种具有补水及保湿、保暖的安全无刺激外用制剂。