目的丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染所致丙型肝炎是慢性肝病及肝细胞癌(hepatic cell cancer,HCC)的病因之一;但迄今尚无疫苗和特异有效的治疗方式。深入研究丙型肝炎病毒的感染与致病机制具有重大的现实意义。本文通过构建丙型肝炎Core和NS5A基因原核表达载体,获得高产量的纯化核心蛋白,再此基础上制备其多克隆及单克隆抗体。本研究通过模板PCR、酶切、转化、诱导、原核表达、蛋白纯化等几个方面来研究HCV Core和NS5A基因在HCC发病过程中的生物学功能。方法1:以HCV株全长cDNA序列为模板,PCR扩增获得核心蛋白Core基因,构建原核表达载体pET-32a(+)-HCV-Core。转化大肠埃希菌DH5α,提取质粒,验证正确后,再次转化大肠埃希菌BL21中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE、Western blot验证融合蛋白的表达。超声破碎表达菌,Ni~+亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性。2:以HCV株全长cDNA序列为模板,PCR扩增获得NS5A基因,转化大肠埃希菌DH5α,提取质粒,验证正确后,与载体pET-32a(+)连接,再转化大肠埃希菌BL21中,构建原核表达载体pET-32a(+)-NS5A。IPTG诱导表达,SDS-PAGE、Westernblot验证融合蛋白的表达。超声破碎表达菌,Ni~+亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性。结果1:Core和NS5A融合蛋白在原核表达系统分别成功表达。2:SDS-PAGE分析表明其为包涵体表达。3:通过Ni~+亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性成功获得了Core和NS5A融合蛋白纯品。结论本研究成功利用大肠杆菌原核表达系统对丙型肝炎Core和NS5A基因进行了诱导表达,表达蛋白通过亲和层析技术进行了纯化。这些都为日后应用纯化蛋白制备具备高效价、高特异性的兔抗多克隆抗体,以及包括免疫组织化学、细胞增殖、细胞信号转导等方法深入研究Core和NS5A在丙型肝炎病毒展过程中的意义奠定了物质基础。