喉癌LCRG1基因启动子克隆、突变和甲基化的研究

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Laryngeal Carcinoma Related Gene 1(LCRG1)是一个喉癌候选抑瘤基因,其转录调控机制不清。我们从如下几方面分析了LCRG1基因启动子的功能:1.通过5’-缺失突变方法,通过瞬时转染与荧光素酶报告基因检测,进一步分析了与该基因表达调控有关的启动子; 2.采用PCR-SSCP (single strand conformation polymorphism, SSCP)检测40例喉癌组织标本LCRG1基因启动子突变情况;3.应用甲基化特异性PCR(Methylation Specific PCR,MSP)检测40例喉癌组织标本LCRG1基因启动子甲基化状态;4.应用半定量RT-PCR检测该基因在40例喉癌组织标本的表达水平。在对LCRG1基因的转录调控机制的研究过程中,我们发现:1. LCRG1基因最小启动子是LCRG1基因转录起始位点上游-169位到-57位的DNA片段。2. LCRG1基因启动子在喉癌组织中无突变。3. LCRG1基因启动子在喉癌组织存在5.00%甲基化改变而正常喉黏膜无甲基化改变。4.RT-PCR显示有40%(16/40)的喉癌组织LCRG1基因存在表达下调。结论:1.LCRG1基因最小启动子是LCRG1基因转录起始位点上游-169位到-57位的DNA片段。2. LCRG1基因启动子在喉癌中无突变,提示它不是该基因在喉癌中表达下调的原因。3. LCRG1基因启动子在喉癌存在5.00%甲基化改变而正常喉黏膜无甲基化改变,启动子甲基化部分改变可能参与LCRG1基因的表达调控。
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