【摘 要】
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目的:胸腺素β4(thymosinβ4 Tβ4)是一种重要的G-肌动蛋白偶联蛋白,参与调控不同组织的炎症反应和创伤愈合,本实验的目的是从分子生物化学水平检测人Tenon囊成纤维细胞(human T
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目的:胸腺素β4(thymosinβ4 Tβ4)是一种重要的G-肌动蛋白偶联蛋白,参与调控不同组织的炎症反应和创伤愈合,本实验的目的是从分子生物化学水平检测人Tenon囊成纤维细胞(human Tenon’s capsule fibroblasts , HTFs)中Tβ4的表达,并研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)对其表达的影响。方法:体外培养原代HTFs,传代后取34代细胞进行实验。一步法提取HTFs RNA,应用RT-PCR检测Tβ4 mRNA的表达,并用免疫组化法检测细胞中Tβ4蛋白的表达。选用终浓度为0 ng/ml(对照组)、1.0、10. 0及100.0ng/ml CTGF处理上述细胞24小时,半定量RT-PCR反应观察CTGF对体外培养HTFs Tβ4 mRNA表达的影响,以β-actin作为内参照。实验结果:RT-PCR扩增得到单一产物,免疫组化结果显示Tβ4在体外培养的HTFs胞浆中表达阳性,胞核中表达阴性。半定量RT-PCR检测结果经图像分析得到,1.0、10. 0及100.0ng/ml CTGF处理组的Tβ4/β-actin的吸光度比值分别为1.11±0.04,1.05±0.03,0.82±0.06,与对照组比值1.23±0.02比较差异有显著意义(P<0.05)。Tβ4/β-actin随着CTGF的浓度增大而降低,呈剂量依赖性。结论:体外培养的HTFs Tβ4表达阳性。CTGF抑制HTFs中Tβ4的表达,这可能是青光眼滤过术后滤过泡瘢痕化发生的机制之一。
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