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目的肾间质纤维化是各种原因慢性肾脏疾病发展到终末期肾衰竭的共同途径和主要病理机制。大量研究证实肾小管上皮细胞-间充质转分化在肾间质纤维化进程中发挥着重要作用。近年来有研究发现白介素是-17(IL-17)在多种组织纤维化中起着重要作用,本文旨在观察IL-17对体外培养的肾小管上皮细胞转分化、细胞增殖及分泌细胞外基质的影响,研究IL-17在肾间质纤维化中的作用和可能的机理,为寻找抗纤维化新的作用靶点和临床治疗策略提供理论和实验依据。方法 1.不同浓度 IL-17A(0、20、40、80、160、320ng/ml)分别刺激培养人肾小管上皮细胞HK-2不同的时间,CCK-8法检测细胞的增殖情况,ELISA法检测其细胞培养上清中Ⅰ型和Ⅲ型胶原的分泌情况,分析时间、剂量依赖作用,确定IL-17A最佳刺激浓度与时间。2.将HK-2细胞分为正常对照组、IL-17A(80ng/ml)组、IL-17A(80ng/ml)+ TGF-β 1 抗体(2μg/ml)组、TGF-β 1(10ng/ml)组、TGF-β 1 抗体(2 μ g/ml)组,Western Blotting法检测细胞中 E-cadherin、α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白表达情况;Real time RT-PCR法检测E-cadherin、α-SMA的mRNA的表达情况;免疫细胞化学法检测细胞中小管上皮标记—E-cadherin及间充质细胞标记—一-SMA蛋白的表达情况。3.为研究IL-17A诱导转分化的机制,实验分为正常对照组、IL-17A(80ng/ml)组、IL-17A(80ng/ml)+BMP-7(50ng/ml)组、TGF-β 1(10ng/ml)+BMP-7(50ng/ml)组、TGF-β 1(l0ng/ml)组,Western Blotting 检测 E-cadherin、α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白的表达含量,RT-PCR法检测α-SMA、Smad3 mRNA的表达。结果1.:①CCK-8检测显示,IL-17A在一定浓度范围内(≤80ng/ml)可促进HK-2细胞增殖,当IL-17浓度≥160ng/ml时,细胞增殖程度反而出现明显下降(P<0.05)。时间依赖试验发现,随着IL-17作用时间的延长,细胞增殖逐渐增加。②ELISA检测发现:IL-17A在0-320ng/ml范围内,随着浓度的增大和时间的延长,HK-2细胞分泌的 Col Ⅰ及 Col Ⅲ均增加。2.Real Time RT-PCR,Western Bloting 及免疫组化研究显示,与正常对照组相比,IL-17A刺激组和TGF-β 1刺激组中E-cadherin基因与蛋白的表达均出现明显减低(P<0.05),α-SMA的表达及Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原蛋白则出现明显升高(P<0.05);当加入TGF-β 1抗体E-cadherin基因和蛋白的表达明显恢复(P<0.05),α-SMA及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达出现显著下降(P<0.05)。3.① Western Blotting 结果发现:IL-17A 和 TGF-β 均可诱导HK-2细胞中α-SMA、Col Ⅰ、Col Ⅲ蛋白的表达升高(P<0.05),且IL-17A的升高作用相比TGF-β 1更为明显;加入BMP-7作用,可一定程度抑制IL-17A或TGF-β1引起的HK-2细胞中α-SMA、Col Ⅰ、Col Ⅲ蛋白的表达升高(P<0.05);②RT-PCR分析发现:IL-17A和TGF-β 1均可诱导HK-2细胞中α-SMA、Smad3 mRNA表达的升高(P<0.05),而BMP-7可一定程度减弱诱导影响(P<0.05)。结论①IL-17A可呈时间和剂量依赖性地促进体外培养的HK-2细胞增殖及细胞外基质的分泌增加。②IL-17A可诱导体外培养的肾小管上皮细胞转分化为肌成纤维细胞,其作用机制与TGF-β1信号相关。③BMP-7可抑制IL-17A诱导的肾小管上皮细胞转分化,其机制是通过抑制Smad3信号分子发挥作用。