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本实验是研究羊栖菜硒多糖对人肝癌HepG2细胞的生长抑制以及凋亡作用,并探讨了它的作用机制和途径。实验中MTT结果显示羊栖菜硒多糖对人肝癌HepG2细胞生长具有一定的抑制作用,且这种抑制作用与羊栖菜硒多糖浓度呈剂量依赖性,羊栖菜硒多糖对HepG2细胞的 IC50 值为 32.47μg/ml。通过羊栖菜硒多糖直接作用于人肝癌HepG2细胞48h以后。用倒置显微镜观看,空白组细胞形态完整,长势良好,排列紧凑。随着硒多糖给药浓度的增加,细胞生长状况逐渐变差,细胞生长不紧凑,开始出现收缩的情况。高浓度组细胞大部分呈现圆球颗粒状,仅有少数细胞贴壁,且细胞形态极差,死细胞大量出现。说明羊栖菜硒多糖可以抑制人肝癌HepG2细胞的生长。羊栖菜硒多糖剂量越高,抑制作用越明显。由于Hoechst33258染色之后,在荧光显微镜下观测,正常细胞的细胞核应该出现均匀的蓝色荧光,而凋亡细胞的细胞核会出现强蓝色荧光和凋亡小体。本实验,人肝癌HepG2细胞给药羊栖菜硒多糖48h以后,随着羊栖菜硒多糖剂量的增加,出现细胞凋亡形态变化的细胞越来越多。空白组结果整个细胞呈现均匀的蓝色荧光,而且细胞以及细胞核形态完整。羊栖菜硒多糖中浓度组细胞核出现分离,碎裂。羊栖菜硒多糖高剂量组细胞最终出现核固缩而且核亮度极高且出现凋亡小体。说明人肝癌HepG2细胞形态变化以及凋亡与羊栖菜硒多糖浓度有关。流式细胞仪检测分析不同浓度的羊栖菜硒多糖作用于人肝癌HepG2细胞48h,有明显的凋亡峰出现,低、中、高组的凋亡率分别是(2.44±0.019)%,(39.18±1.90)%,(42.77±3.02)%。随着药物浓度的增长而提高,进一步说明羊栖菜硒多糖对人肝癌HepG2细胞的抑制作用与诱导肿瘤细胞凋亡相关。在以上实验的基础上,本实验还考察了羊栖菜硒多糖诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的机制与途径。不同浓度的羊栖菜硒多糖对人肝癌HepG2细胞作用48h以后,采用激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位、钙离子、活性氧含量的变化,线粒体膜电位荧光强度分别为:低剂量27.66±4.50、中剂量15.69±3.30、高剂量10.89±4.49。Ca2+含量荧光强度分别为:低剂量7.03±0.81、中剂量9.96±1.34、高剂量18.63±5.13。活性氧含量荧光强度分别为:低剂量4.65±0.29、中剂量5.56±0.27、高剂量7.14±0.33。检测结果表明羊栖菜硒多糖可以使人肝癌HepG2细胞的线粒体膜电位降低并且呈现剂量依赖性。随着羊栖菜硒多糖剂量的增加人肝癌HepG2细胞内钙离子浓度逐渐升高。并且人肝癌HepG2细胞内部的活性氧含量也随着羊栖菜硒多糖浓度的增加而上升,而且有剂量关系。综上所述,本论文采用体外实验证明了羊栖菜硒多糖能够诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,而且线粒体途径是羊栖菜硒多糖诱导人肝癌HepG2细胞的可能途径之一。