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目的:1.观察mi R-193b-3p对大鼠局灶性脑缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)损伤的保护作用。2.观察mi R-193b-3p对氧糖剥夺和复氧(oxygen–glucose deprivation and re-oxygenation,OGD/R)致神经元损伤的保护作用。3.初步探讨mi R-193b-3p神经保护作用的机制。方法:1.mi R-193b-3p对大鼠局灶性脑I/R损伤的保护作用观察(1)采用线栓法构建成年雄性SD大鼠大脑中动脉闭塞模型。根据脑缺血90min后再灌注不同时间点,设立7组:假手术组、3h组、6h组、12h组、24h组、48h组、72h组,n=3。采用q PCR检测大鼠皮质mi R-193b-3p和5-LOX m RNA表达水平。(2)采用线栓法致成年雄性SD大鼠大脑中动脉闭塞缺血90 min再灌注24h建立局灶性脑缺血再灌注损伤模型。实验设立6组:假手术组、模型+溶剂对照(vehicle)组、模型+mi R-193b-3p agomir组、模型+agomir control组、模型+mi R-193b-3p antagomir组、模型+antagomir control组,n=11。假手术组、vehicle组侧脑室给予dd H2O;其余各组侧脑室分别给予mi R-193b-3p agomir、agomir control、mi R-193b-3p antagomir、antagomir control。(3)观察指标及方法:采用神经功能缺损评分观察大鼠神经行为变化;用TTC染色观察大鼠脑组织梗塞体积;HE染色观察大鼠脑组织病理形态学变化;ELISA法检测大鼠脑组织LTB4、Cys LTs含量;q PCR检测大鼠脑组织5-LOX m RNA表达;WB检测大鼠脑组织5-LOX蛋白表达。2.mi R-193b-3p对OGD/R致神经元损伤的保护作用观察(1)采用糖氧剥夺2 h、复糖复氧24 h处理PC12细胞,建立OGD/R)致神经元损伤模型。(2)实验设立6组:normoxia组、OGD/R组、OGD/R+mim-mi R-193b-3p组、OGD/R+mim-mi R-NC组、OGD/R+inh-mi R-193b-3p组、OGD/R+inh-mi R-NC组。(3)观察指标及方法:采用MTT法检测PC12细胞存活率;生化酶法检测细胞LDH漏出率;流式细胞术测定细胞凋亡率;q PCR检测细胞5-LOX-m RNA表达;WB检测细胞5-LOX蛋白表达。3.mi R-193b-3p对5-LOX靶向作用观察(1)通过在线目标预测数据库,进行生物信息学分析以确定5-LOX是否为mi R-193b-3p的靶基因。(2)利用双荧光素酶报告基因系统检测mi R-193b-3p对其靶基因5-LOX荧光素酶活性的作用。(3)mi R-193b-3p联合5-LOX-si RNA对OGD/R致神经元损伤的作用观察PC12细胞设立8组:normoxia组、OGD/R组、OGD/R+mim-mi R-NC组、OGD/R+mim-mi R-193b-3p组、OGD/R+mim-mi R-193b-3p+si-5-LOX组、OGD/R+inh-mi R-NC组、OGD/R+inh-mi R-193b-3p组、OGD/R+inh-mi R-193b-3p+si-5-LOX组。采用MTT法检测细胞存活率;生化酶法检测细胞LDH漏出率;流式细胞术测定细胞凋亡率。结果:1.mi R-193b-3p对大鼠局灶性脑I/R损伤的保护作用(1)与假手术组相比,再灌注12及24小时,5-LOX m RNA在局灶性脑I/R损伤大鼠皮层表达显著升高(P<0.05)。与假手术组相比,再灌注3、6、12、24、48、72小时,mi R-193b-3p在局灶性脑I/R损伤大鼠皮层表达显著升高(P<0.05)。(2)与假手术组相比,vehicle组大鼠神经功能缺损评分显著增加(P<0.01);与agomir control组相比,mi R-193b-3p agomir组大鼠神经功能缺损评分明显减少(P<0.01);与antagomir control组相比,mi R-193b-3p antagomir组神经功能缺损评分明显增加(P<0.01)。(3)与假手术组相比,vehicle组大鼠脑梗死体积明显增加(P<0.01);与agomir control组相比,mi R-193b-3p agomir组大鼠脑梗死体积明显减少(P<0.01);与antagomir control组相比,mi R-193b-3p antagomir组大鼠脑梗死体积明显增加(P<0.05)。与假手术组相比,vehicle组皮层神经元出现明显的核固缩和核深染;与agomir control组相比,mi R-193b-3p agomir组神经元的核固缩和核深染损伤减轻;与antagomir control组相比,mi R-193b-3p antagomir组进一步加剧了脑I/R损伤诱导的细胞形态学变化。(4)与假手术组相比,vehicle组皮层LTB4、Cys LTs含量显著升高(P<0.01);与agomir control组相比,mi R-193b-3p agomir组皮层LTB4、Cys LTs含量显著降低(P<0.01);与antagomir control组相比,mi R-193b-3p antagomir组皮层LTB4、Cys LTs含量显著升高(P<0.05)。(5)与假手术组相比,vehicle组皮层5-LOX m RNA和蛋白表达明显升高(P<0.01);与agomir control组相比,mi R-193b-3p agomir组皮层5-LOX m RNA和蛋白表达明显降低(P<0.01);与antagomir control组相比,mi R-193b-3p antagomir组皮层5-LOX m RNA和蛋白表达显著升高(P<0.01)。2.mi R-193b-3p对OGD/R致神经元损伤的保护作用(1)与normoxia组相比,OGD/R组细胞存活率明显下降(P<0.01)、LDH漏出率明显增加(P<0.01)、细胞凋亡率增加;与mim-mi R-NC组相比,mim-mi R-193b-3p组细胞存活率显著提高(P<0.01)、LDH漏出率明显降低(P<0.01)、细胞凋亡率减少;与inh-mi R-NC组相比,inh-mi R-193b-3p组细胞存活率显著降低(P<0.01)、LDH漏出率明显增加(P<0.01)、细胞凋亡率增加。(2)与normoxia组相比,OGD/R组细胞5-LOX m RNA和蛋白表达明显升高(P<0.01);与mim-mi R-NC组相比,mim-mi R-193b-3p组细胞5-LOX m RNA和蛋白表达明显降低(P<0.01);与inh-mi R-NC组相比,inh-mi R-193b-3p组细胞5-LOX m RNA和蛋白表达显著升高(P<0.01)。3.mi R-193b-3p对5-LOX的靶向作用观察(1)生物信息学分析结果显示,mi R-193b-3p与5-LOX m RNA的3’UTR有结合位点。(2)双荧光素酶基因测定报告显示,mi R-193b-3p与5-LOX m RNA的3’UTR结合,且影响荧光表达情况。(3)mi R-193b-3p inhibitor明显降低OGD/R处理组PC12细胞存活率、明显增加细胞LDH漏出率和细胞凋亡率;mi R-193b-3p inhibitor合用5-LOX si RNA组细胞存活率明显增加、细胞LDH漏出率和细胞凋亡率明显降低。结论:1.mi R-193b-3p agomir对大鼠局灶性脑I/R损伤具有保护作用,并可降低大鼠皮层5-LOX表达及其下游产物水平。2.mi R-193b-3p mimic对OGD/R致神经元损伤有保护作用,亦可降低OGD/R引起的5-LOX表达增加。3.mi R-193b-3p和5-LOX可能存在直接结合位点。4.mi R-193b-3p对5-LOX表达有调控作用。