中国花生品种遗传多样性研究及分子ID数据库的构建

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花生是我国重要的油料作物、经济作物和出口创汇农产品。近年来,我国花生新品种数量急剧增加,同时高频率的使用少数骨干亲本使品种的遗传基础趋于狭窄,从而加大了利用外观表型性状区别不同花生品种的难度。花生品种分子ID数据库的构建在花生品种真实性及纯度鉴定、区试及审定品种质量监控、品种权登记保护等方面具有重要应用价值,花生品种遗传多样性研究对花生品种改良、新品种培育、优异种质资源的挖掘、创新和利用具有重要意义。本研究首先对花生叶片DNA的快速提取方法进行了优化,旨在筛选出一种简便快捷、不影响PCR分析的花生叶片DNA快速提取的方法。利用SSR与AhTE两种分子标记技术对219份花生种质进行遗传多样性分析,并且首次采用资源特征分析软件(ID analysis1.0)构建花生品种的分子ID,用于花生品种的鉴定。主要研究结果如下:(1)通过对高通量DNA提取法、SDS简易法、TPS法以及TENP法四种不同的DNA提取方法进行比较和优化。研究结果表明,改良TPS法优于其它三种改良后的方法,提取的DNA可用于花生的SSR分析。(2)利用45对SSR引物以及31对AhTE引物对219份花生材料进行扩增,所有引物均表现较好的多态性,且AhTE引物表现出了较高的多态性。45对SSR引物共扩增检测出131个等位基因,平均每个引物为3个等位基因,PIC值最高为0.783。31对AhTE引物共检测出的75个位点,平均约为2.4个,PIC值最高为1.268。(3)利用NTSYS软件进行聚类分析。结果表明,各花生品种间的遗传相似系数在0.59-0.96之间;在相似系数为0.634处,可以分为6个类群。其中部分花生材料间具有相对较高的相似系数,说明其亲缘关系较近。由聚类图可以看出219个花生品种的地域特征并不明显。(4)应用资源遗传统计软件分析获得品种的特异性指数平均值为123.288,介于83.437~402.578之间。利用资源特征分析3.0软件构建花生种质的分子ID数据库。利用34对SSR引物可构建163份花生材料的唯一分子ID,同时得到了2个具有特异等位基因的品种,利用这些特异等位基因可直接用来鉴定品种。利用AhTE引物的扩增结果,最终可通过15对引物扩增的26个多态性位点构建210份花生材料的唯一分子ID。
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