趋磁细菌的筛选及磁小体的应用研究

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趋磁细菌代表一类能够沿着地磁场线作定向运动的原核生物的总称。它们都是革兰氏阴性菌,并且能够利用环境中的铁离子在体内合成有链状排列的纳米级磁性矿物晶体,称为磁小体。本项研究的目的是从样品中筛选出趋磁细菌,并对菌体的培养基和生长条件进行优化,提取出磁小体并考察磁小体作为载体的应用情况。首先取样自鞍山铁矿区地表土,经过富集培养及半固体培养基平皿培养分离出趋磁细菌,然后通过单因子实验及正交实验确定了该菌的最适培养基及培养条件。采用自制的柱分离装置,结合超声波破碎及离心等方法,提取纯化出较纯净且具有生物膜的磁小体。应用该磁小体制备出白蛋白磁性微球,并用此微球为载体,采用交联法固定化β-淀粉酶。分离出的趋磁细菌具有良好的磁感应性,经革兰氏染色验证确定是革兰氏阴性菌。菌体生长的最适培养基(每升):无水乙酸钠0.1g;氯化铵0.25g;1M KH2PO4-K2HPO4缓冲液(pH6.7)0.5ml;维生素混合液(10×)1ml;矿物质混合液(10×)1ml;0.01MFeCl3溶液2ml。最适生长条件为:培养基pH值6.7,在28℃培养箱内静置培养。提取出的磁小体平均粒径为80nm,成球形,大小均匀,有较强的磁感应性。以它为磁流体制备出的白蛋白磁性微球,大小比较均匀,主要粒径分布在280~300nm,当戊二醛甲苯溶液加入0.5ml、白蛋白溶液浓度为10g·L-1时,磁性微球的磁响应性及分散性最好。用该微球为载体固定化β-淀粉酶,最适戊二醛质量分数为0.06%,最适给酶量为1.5ml,所得到的固定化酶最高活性达2753.64U·g-1,活性回收率为76.86%。同时还研究了固定化酶的理化性质,确定了该固定化酶的最适温度为70℃,最适pH值为5.5。
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