神经元性一氧化氮合酶在电针调节抑郁症双重状态的作用研究

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目的:初步探讨神经元性一氧化氮合酶(nNOS)对电针调节抑郁症双重状态-焦虑和抑郁样行为的影响。方法:实验一:将SD大鼠(84只)随机分为6组:正常组(1和2)、焦虑组、抑郁组、电针抗焦虑组和电针抗抑郁组。分别采用慢性温和不可预知应激(CUMS)7天和21天结合孤养方法制备焦虑和抑郁样模型,正常组(1和2)不予任何干预,造模同时电针治疗抗焦虑和抗抑郁组,选择“百会”和“印堂”穴,频率分别为100Hz和2Hz、电流强度约为1mA,留针15min,每日一次,分别连续治疗7天和21天。实验二:将SD大鼠(24只)随机分为3组:正常组(Control)、足底电击组(FootshockFS)、电针抗足底电击组(EA-FS)。采用足底电击结合孤养的方法制备焦虑样模型,电针“百会”和“印堂”穴,频率100Hz,电流强度约为1mA,留针15min,每日1次,连续治疗7天。治疗结束后,采用高架十字迷宫实验(EPM评分)评价焦虑样行为、开野实验(Open-field)、体重、糖水相对消耗量等评价抑郁样行为,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western-Blet)和免疫组化方法分别检测各组大鼠海马神经元型一氧化氮合酶(Neuronal Nitric Oxide Synthase,nNOS)表达和CA3、CA1区蛋白的表达。结果:实验一:1.行为学测试:高架十字迷宫实验(EPM评分):与正常组1比较,大鼠接受CUMS7天后在开臂/(开臂+闭臂)的时间和次数百分比显著降低(P<0.01),电针能够使其升高(P<0.01);与正常组2比较,开野实验(Open-field)中大鼠接受CUMS21天后其水平运动距离和中央探索次数百分比均显著下降(P<0.01),电针能够使其显著性提高(P<0.01);体重测量:与正常组2比较,造模第7天,抑郁组和电针抗抑郁组体重均有下降趋势,但两组间无统计学差异,第14、21天抑郁组体重减少(P<0.01),电针可以使其增加(P<0.05);糖水相对消耗量实验:与正常组2比较,造模第7天,抑郁组糖水相对消耗量稍有下降,但无统计学差异,第14、21天抑郁组糖水相对消耗量降低(P<0.01),电针能够使显著升高(P<0.05);2.RT-PCR显示,焦虑和抑郁组海马nNOS mRNA表达均低子正常组(1和2),电针均可以升高其表达;3.蛋白免疫印迹(Western-Blet)显示,焦虑和抑郁组海马nNOS蛋白表达均低于正常组(1和2),电针均能够升高其表达;4.免疫组化显示,与正常组(1和2)比较,焦虑和抑郁组海马CA3和CA1区nNOS平均光密度和累计光密度值均显著降低(P<0.05),电针可以使其表达提高(P<0.05);实验二:1.行为学测试:高架十字迷宫实验(EPM评分):与正常组(Control)比较,大鼠接受足底电击7天后在开臂/(开臂+闭臂)的时间和次数百分比显著降低(P<0.05),电针能够使其升高(P<0.05); 2.RT-PCR显示,足底电击组(FS)海马nNOS mRNA表达高于正常组(Control),电针可以降低其表达;3.免疫组化显示,与正常组(Contro1)比较,足底电击组(FS)海马CA3区nNOS平均光密度和累计光密度值均显著升高(P<0.05),电针可以使其恢复性下调(P<0.05),而CA1区nNOS平均光密度和累计光密度值均显著降低(P<0.01),电针可以升高其表达(P<0.01)。结论:抑郁症在不同的应激时程一慢性应激早期(CUMS 7天)和晚期(CUMS21天)表现出不同的状态,即焦虑和抑郁样状态,随着应激方式、强度等不同,nNOS的表达也会相应表现出不同状态,且电针具有明显抗焦虑和抑郁样作用,说明nNOS可能是电针调节抑郁症双重状态机制之一。
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