目前，克雷伯杆菌发酵法生产1，3-丙二醇（简称1，3-PD）成为人们研究的热点，其中，提高发酵的产物浓度、相对于甘油的转化率及生产强度等是发酵工艺改进的目标。本文研究了生物酶法生产1，3-丙二醇的过程工艺，主要内容如下： 通过正交实验分析了碳、氮、磷等营养物质对发酵的影响程度，然后通过批式流加发酵考察了细菌生长速率和产物合成速率的关联，以及工艺改变对最终发酵产物浓度及生产强度的影响。实验结果表明：三大营养源（C、N和P）对细菌生长和消耗甘油能力的影响大小为：C>N>P。确定以营养基质氮源限制性流加的发酵工艺，过低的氮源浓度，细菌生长受到限制，影响产物1，3-PD的合成；过高的氮源浓度，细菌浓度增加，但1，3-PD的转化率降低，用于生长和维持代谢所消耗的甘油量增加；以0．41g／（L·h）的氮源流加速率，残余氯化铵浓度在0．1 g／L时，转化率和生产强度最高。发酵25h～28h后，1，3-丙二醇最终浓度达到52．03 g／L，生产强度为2．04g/（L·h），相对于甘油的摩尔转化率为0．66，分别比氮源限制前提高了28．0％、35．1％及29．4％。 分析了克雷伯杆菌代谢过程中3种关键酶（甘油脱氢酶（GDH）、甘油脱水酶（GDHt）和1，3-丙二醇氧化还原酶（PDOR））的变化曲线，发现3种酶活分别在7 h～10 h内达到最佳水平。 通过研究甘油、葡萄糖、1，3-丙二醇及乙酸对发酵过程中3种关键酶活的影响，实验表明：甘油浓度在30g／L～50g／L可以很好地促进3种关键酶活，有利于提高产物的浓度和转化率；较低浓度的乙酸和1，3-丙二醇能促进3种酶活，在保存培养基中这二者还能较好地诱导及保持酶活。在优化的保存培养基条件下，克雷伯杆菌生长能力和生产能力提高。 开展含氮化合物（尿嘧啶、氯化胆碱及L-谷氨酰胺等）、表面活性剂类（CTAB、曲拉通X-100、OP-10及Tween-80等）及抗生素类（青霉素和氨苄青霉素）对发酵中细菌生长和酶活的影响实验。实验结果表明：尿嘧啶、OP-10及氨苄青霉素都能较好地促进3种关键酶活，并能提高最终1，3-丙二醇浓度及转化率。 0．01g/L～0．2g／L的尿嘧啶显著促进了GDH活性，当浓度继续增大时GDH活性开始降低，而在这个浓度范围内GDHt的活性也有一定的提高；尿嘧啶的适宜添加时间在8h～12h。 1g/L～2g/L OP-10对GDH和PDOR有促进作用，浓度高时对PDOR效果更明显，而对GDHt有稍微地抑制作用，OP-10的适宜添加时间8h～12h。低浓度的氨苄青霉素（低于100 mg／L）能够促进GDH和GDHt的活性，青霉素的适宜添加时间10 h～14 h。通过TEM照片发现，OP-10和氨苄青霉素都可以改善细胞通透性，促进细菌生长和产物合成。 5 L发酵罐中，在适宜时间流加尿嘧啶、OP-10及氨苄青霉素后，1，3-丙二醇浓度及相对于甘油的摩尔转化率较空白都有明显增长，最大可达到56．2g／L、0．70mol／mol，分别增长了17．8％及20．7％。