大豆疫霉引起的大豆疫霉根腐病是严重影响大豆生产的毁灭性病害之一,能在大豆的任何生育期进行侵染并造成危害,广泛分布于世界各大豆产区。目前该病已经在我国一些大豆主要产区发生和为害,并在局部地区造成较大产量损失,对我国的大豆生产造成很大的危害。应用抗、耐病品种是控制大豆疫霉根腐病的最经济有效的方法。掌握一个地区生理小种的类型,是选用抗源并进行有针对性、有成效地选育抗病品种的科学依据。抗病育种的关键是合理利用抗源,不断筛选和发掘新的抗源。拓宽基因资源、减轻新生理小种对生产造成的压力,是推进抗病育种进程的保证。大豆对疫霉根腐病的抗性由两类基因所决定。一类是由单基因或寡基因(Rps)控制的质量性状抗病性(即符合基因对基因假说),可以抵御病害的扩展,迄今已经在4个大豆连锁群的8个位点上鉴定并命名了14个抗病基因,然而大豆疫霉变异迅速,新的小种不断出现,现可以侵染所有含已知抗病基因的品种。另外一类抗性是由多基因控制的数量性状抗病性,可以减少病害造成的损失,减轻和减缓新生理小种产生的压力。因此在寻找新的完全抗性基因外,还应关注对具有部分抗性资源的筛选,获得具有较高部分抗性的品种。本研究主要针对在南京农业大学江浦试验站分离得到的菌株进行毒性鉴定,对新的生理小种进行抗源筛选,对抗性基因进行SSR分子标记,确定抗性基因所处的连锁群并进行精确定位；利用大豆芯片筛选大豆疫霉根腐病抗病相关基因,初步了解大豆抗大豆疫霉根腐病的分子机制。主要研究结果如下：1、大豆疫霉的分离及毒性鉴定2005、2006年夏在南京农业大学江浦农场试验田发生了比较严重的大豆根腐病,采用特异性PCR检测到发病组织中有大豆疫霉,经室内诱捕和分离,从发病田块的土壤和发病植株上共分离到4个大豆疫霉菌株PNJ1、PNJ2、PNJ3和PNJ4。用含有不同抗病基因的14个鉴别寄主测定这4个大豆疫霉菌株的毒力公式,PNJ1和PNJ2的毒力公式相同,为1d,2,3b,3c,4,6,7; PNJ3为1a,1b,1c,1d,1k,2,3b,3c,5,7; PNJ4为1a,1b,1c,1d,1k,2,3b,3c,4,6,与国际上已经报道的大豆疫霉菌株的毒力公式不同,为新的生理小种。2、抗源筛选(1)完全抗性的筛选：采用下胚轴创伤接种方法鉴定611份大豆种质对3个具有不同毒力公式的大豆疫霉菌株PNJ1、PNJ3和PNJ4的完全抗性,结果表明这些种质对3个菌株共产生8种反应类型。其中,106份大豆种质对3个菌株都表现为抗病,占鉴定总数的17.3%;253份对3个菌株都表现为感病,占鉴定总数的41.4%。总体上,黄淮海地区的抗性种质最多,依次是南方地区和东北地区。按省份归类,抗3个菌株资源较多的省份依次为江苏、河南、山东、安徽。(2)部分抗性的筛选：在对PNJ1等3个菌株表现感病的大豆种质中选择农艺性状好的123份种质,采用根部创伤接种方法来鉴定其对大豆疫霉菌株PNJ1的部分抗性,筛选到47份具有较高部分抗性的大豆种质,占鉴定品种的38.2%。3、完全杭性的遗传分析及基因定位根据大豆品种鲁豆4号与苏88-M21对9个大豆疫霉菌株的反应类型,经基因推导发现这2个品种可能含有新的抗病基因。利用大豆疫霉菌株对鲁豆4号×诱处4号的F2:3群体和苏88-M21×新沂小黑豆的RIL群体进行抗性分析,表明鲁豆4号对大豆疫霉菌株Pm28和苏88-M21对大豆疫霉菌株Pm14的完全抗性是由1对显性主基因控制的,这2个基因暂定名为RpsLu4和RpsSu。采用集团分离分析方法(BSA),将2个抗性基因RpsLu4和RpsSu分别定位在N和O连锁群。4、部分抗性的遗传分析及基因定位利用“苏88-M21×新沂小黑豆”衍生的176个重组自交系(NJRISX)及其亲本为材料,以病斑长度为指标,采用主基因+多基因混合遗传模型分离分析法和WinQTL Cartographer Version 2.5软件的复合区间作图法(CIM)和多区间作图法(MIM)对部分抗性进行遗传分析和QTL定位。结果表明：苏88-M21对大豆疫霉P6497的部分抗性是由2对互补的主基因加多基因控制的,主基因遗传率为74.13%,多基因遗传率为23.79%;在QTL分析中,利用CIM检测到2个部分抗性QTL(qPR-15-1和qPR-10-2),分别位于E、O连锁群上,表型贡献率分别为13.95%,8.25%。利用MIM检测到3个QTL(qPR-15-1、qPR-10-2和qPR-6-3),分别位于C2、E和O连锁群上,表型贡献率为4.30%-15.90%。利用2种方法检测到的2个QTL(qPR-15-1和qPR-10-2)区间相同。5、抗性相关基因的筛选与分析利用大豆基因组寡聚核苷酸芯片,分析大豆抗病品种苏88-M21在大豆疫霉侵染幼龄大豆下胚轴后基因的表达情况,获得了688个差异表达明显的探针,代表了665个受大豆疫霉诱导的差异表达基因,主要包括病程相关蛋白、防卫反应基因、转录因子、信号转导因子等。在接种大豆疫霉后上调表达的基因主要是与抗病相关的基因,包括PR5蛋白、过氧化物酶、谷胱甘肽转移酶等；下调表达的基因有与细胞壁形成相关的基因,包括富含脯氨酸的细胞壁蛋白、木葡聚糖转葡糖苷酶等。本研究选择9个与抗病相关的大豆基因和1个大豆疫霉基因进行实时定量RT-PCR分析,以验证基因芯片的结果,结果表明这10个基因在大豆接种大豆疫霉后不同时间的表达情况与基因芯片的结果基本一致,说明基因芯片的数据是可靠的。