论文部分内容阅读
该文主要以酪朊酸钠为原料,利用可控酶解技术、SDS-PAGE电泳、超滤分离技术,研究小分子肽的制备、分子量分布以及分离纯化等.在可控酶解工艺优化的研究中,主要研究了酶解时间、酶解温度、加酶量、底物初始浓度、pH值对酶解的影响,研究结果如下:以小分子肽得率高低为判断标准,确定碱性蛋白酶水解酪朊酸钠的最佳条件为:温度为60℃,pH为6.5,酶解时间约为12小时,底物浓度为10﹪,碱性蛋白酶用量为300u/g(以酪朊酸钠原料计);中性蛋白酶水解酪朊酸钠的最佳条件为:温度为45℃,酶解时间为12小时,加酶量为200u/g(以酪朊酸钠原料计),pH为6.5,底物浓度为10﹪;复合蛋白酶水解酪朊酸钠的最佳条件为:温度为50℃,酶解时间为12小时,加酶量为200u/g(以酪朊酸钠原料计),pH为6.5,底物浓度为10﹪;大酶(碱性蛋白酶和中性蛋白酶)酶解酪朊酸钠的最佳条件为:温度为45℃,酶解时间为12小时,加酶量为200u/g(以酪朊酸钠原料计),pH为6.5,底物浓度为10﹪,碱性蛋白酶和中性蛋白酶比例为1:2,且同时加入.对不同蛋白酶的酪朊酸钠水解液进行氨基酸测定,结果表明,不同蛋白酶的酪朊酸钠水解液中游离氨基酸总量由大到小的顺序为:中性蛋白酶>双酶>复合蛋白酶>碱性蛋白酶.不同蛋白酶切割酪蛋白分子链的位点也有不同,但主要切割位点集中在以-Ile、Trp、-Lys、-Leu、-Phe、-Tyr等氨基酸连接的肽键部位.对水解液进行感官评价得知,中性蛋白酶水解液最苦,经过相关分析,认为苦味肽是引起水解液苦味的主要因素,疏水性氨基酸是次要因素.酶解液超滤分离研究表明,随着酶解时间的延长,透过率不断提高,平均透过速率也越来越大,由0.937ml/min增加到1.934ml/min,而截流率是逐渐降低的.相应地,其总蛋白的透过率从8.13﹪上升到36.93﹪,总肽的透过率从20.78﹪上升到62.73﹪.由透过液的SDS-PAGE电泳图谱看出,透过液中组分的分子量都低于10KDa,证实了10KDa分离膜对酪朊酸钠水解液中不同分子量组分具有良好的分离作用.