广西农贸市场环境标本禽流感病毒核酸检测及亚型分布研究

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目的调查2010-2011年广西壮族自治区农贸市场中的活禽宰杀场以及活禽销售市场中禽流感病毒污染的问题,了解高致病性禽流感病毒及其H5、H7及H9亚型在农贸市场活禽交易场所环境标本中的分布情况,为制定人感染高致病性禽流感的预防控制策略和措施提供科学依据。方法1.在全区14个地级市内,以满足设立观察场所条件的农贸市场作为观察场所,以其中的活禽市场作为采样点。采集具有代表性的水、禽类粪便及笼具表面涂抹擦拭物三种环境标本,各个观察场所每季度采集一次,每次采集标本不少于3份,全年采集标本量不少于12份,标本采集后,在4℃条件下48小时内运送到监测实验室。2、实验室检测,采集标本后1周内使用荧光定最PCR方法对标本进行A型流感病毒核酸检测,A型流感病毒核酸阳性的标本再进行H5、H7、H9亚型检测。3、数据分析,用Epidata3.0创建数据库并进行数据录入,应用spss13.0统计软件包进行统计分析。统计学方法采用R×C表χ2检验和精确概率法,所有统计检验均为双侧检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果1、2010-2011年广西农贸市场环境标本中A型流感病毒及其H5、H7和H9亚型禽流感病毒核酸检出情况:2010-2011年在广西14个地市开展的农贸市场环境标本中禽流感病毒分布的调查工作,涉及14个地市的62个农贸市场,其中2010年采集并完成检测标本649份,经检测A型流感病毒阳性128份,阳性率为19.7%,其中H5亚型阳性83份,占64.8%,H9亚型阳性11份,占8.6%,H7亚型阳性1份,占0.8%,其中A型流感病毒未做亚型分析33份,占25.8%。2011年采集的标本量为1470份,A型流感病毒阳性557份,阳性率为37.9%,H5亚型阳性245份,占44.0%,H9亚型阳性222份,占40.0%,H7亚型阳性5份,占0.9%,未分亚型85份,占15.3%。2、不同类型环境标本A型流感病毒及H5、H7和H9亚型禽流感病毒核酸检出情况:2010-2011年采集并完成检测的三种类型环境标本中均可检出A型流感病毒阳性,采集到污水标本707份,A型阳性352份,阳性检出率49.8%,阳性率位于三类标本之首,其次是笼具涂抹标本,A型阳性检出率为29.0%(207/714),粪便标本为698份,阳性126份,阳性检出率为18.1%,三者的阳性检出率的差异有统计学意义(χ2=167.2,P=0.000)。在三种环境标本中,污水标本中检出H5亚型阳性构成比最高,占52.0%(183/352),笼具涂抹标本中检出H9亚型阳性的百分比高于其他两种类型标本,占34.3%(71/207)。3、禽流感病毒地区分布:2010年环境标本中A型流感病毒核酸阳性率较高的分别是北海、崇左、河池、桂林、钦州和梧州市;2011年采集到的环境标本中检出A型流感病毒核酸阳性率较高的分别是河池、南宁、来宾、钦州、桂林和崇左市。4、不同季度采集的环境标本,A型流感病毒及其H5、H7和H9亚型禽流感病毒核酸检出情况:两年环境标本中A型流感病毒的阳性率最高为第2季度,阳性率为39.2%(179/457),4个季度阳性检出率差别有统计学意义(χ2=16.8,P=0.001);比较不同季度各亚型检出情况时,差别有统计学意义(P=0.04),可以认为不同季度采集的禽流感病毒各亚型检出构成比不同。结论1、2010-2011年,除了柳州市未检出A型流感病毒核酸阳性外,其余市均可检出A型阳性病毒,禽流感病毒在我区农贸市场的环境标本中分布广泛。2、不同类型环境标本,A型流感病毒阳性检出率不同,H5、H7和H9亚型禽流感病毒构成比也不同:三种环境标本均可检出A型流感病毒阳性,并且阳性检出率均较高,其中污水标本中A型流感阳性率最高,H5亚型病毒株检出的阳性率最高也为污水标本,应加强对农贸市场中的污水进行禽流感病毒病原学监测,同时也应该加强管理禽类粪便,避免人在与禽接触的过程中产生病毒由禽到人的传播。3、研究结果还显示2010-2011年,广西农贸市场活禽销售、宰杀场所中禽流感病毒感染存在明显的季节性,4月份到6月份为环境污染病毒较严重的季节,因而应在高发季节来临之前加强禽流感的防控工作。
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