贮藏温度低于13℃时,香蕉果实极易发生冷害,影响其商品价值。因此,对香蕉果实采后耐冷性的分子机制进行研究,具有重要的科学意义。WRKY是植物所特有的一类转录因子,参与调控植物的生长发育、衰老、激素信号转导和逆境响应等一系列生物学过程。脱落酸(ABA)是植物主要激素之一,在逆境响应过程中发挥重要作用。然而,WRKY转录因子是否参与ABA诱导的香蕉果实耐冷性以及其具体机制,目前尚不明确。为此,本文基于香蕉果实冷胁迫响应相关的RNA-seq表达谱,挑选响应冷胁迫的WRKY转录因子,分析其基因表达、亚细胞定位和转录活性等特性,重点分析WRKY对ABA生物合成的关键基因,9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶基因(NCED)的转录调控,以此阐明WRKY转录因子调控ABA诱导香蕉果实耐冷性的具体机制。主要研究结果如下:1.100μM外源ABA处理可以减轻香蕉果实冷害,增强果实耐冷性;从RNA-seq表达谱中挑选了4个响应冷胁迫的WRKY转录因子,分别命名为Ma WRKY31,MaWRKY33,MaWRKY60和MaWRKY71。进一步实时荧光定量分析显示,冷胁迫诱导了MaWRKY31/33/60/71的表达,外源ABA处理后,MaWRKY31/33/60/71的表达更强。2.克隆获得了Ma WRKY31,MaWRKY33,MaWRKY60和MaWRKY71基因全长序列。序列比对和进化树等生物信息学分析表明,MaWRKY33含有2个WRKY结构域,属于WRKY家族的第I类,MaWRKY31,MaWRKY60和MaWRKY71含有1个WRKY结构域,分别属于WRKY家族的IIb,IIa和IIc类。亚细胞定位显示,MaWRKY31,MaWRKY33,MaWRKY60和MaWRKY71均定位在细胞核,为核蛋白。转录活性分析表明MaWRKY31,MaWRKY33,MaWRKY60和MaWRKY71具有转录激活活性,是转录激活子。3.分析了香蕉基因组中的5个NCED基因(MaNCED1-MaNCED5)的表达特性。除了MaNCED3,冷胁迫诱导了MaNCED1/2/4/5的表达,外源ABA处理后,其表达更强,尤其以MaNCED1和MaNCED2更为显著。4.克隆获得了MaNCED1和MaNCED2的启动子,分析显示含有WRKY转录因子的结合元件W-box(TTGAC)。进一步凝胶阻滞分析(EMSA)和双荧光素酶分析(Dual-Luc)表明Ma WRKY31,MaWRKY33,MaWRKY60和MaWRKY71均可以直接结合MaNCED1和MaNCED2的启动子,并激活它们的活性。上述结果表明,WRKY转录因子通过直接调控ABA合成关键基因NCEDs的表达,进而参与香蕉果实对冷胁迫响应以及ABA诱导的耐冷性。