【摘 要】
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金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus）易引起奶牛慢性和隐性的乳腺内感染（Intramammary Infections,IMI）,其生物被膜（biofilm,BF）的形成能力是推动IMI发生发展的关键因素,BF是一种可以在生物和非生物的表面形成的有组织的、复杂的和固着的结构性细菌群落,BF的形成能够使S.aureus在恶劣环境中生存并持久存在。近年来,由于临
【基金项目】
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宁夏回族自治区2020年农业关键技术和重大实用技术推广项目（规模养殖场减抗养殖关键技术开发与示范）；
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金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus）易引起奶牛慢性和隐性的乳腺内感染（Intramammary Infections,IMI）,其生物被膜（biofilm,BF）的形成能力是推动IMI发生发展的关键因素,BF是一种可以在生物和非生物的表面形成的有组织的、复杂的和固着的结构性细菌群落,BF的形成能够使S.aureus在恶劣环境中生存并持久存在。近年来,由于临床上抗菌药物的不合理使用,多重耐药金黄色葡萄球菌（Multi-drug resistant Staphylococcus aureus,MDR S.aureus）的出现导致治疗药物选择困难的问题,研究表明,紫锥菊Echinacea purpurea（L.）Moench具有免疫调节和抗炎的双重作用,因此,本研究探究了紫锥菊提取物对MDR S.aureus BF形成的抑制及小鼠乳腺炎模型的治疗效果,为紫锥菊提取物用于临床治疗奶牛乳腺炎奠定研究基础。本研究通过棋盘法测定紫锥菊提取物和抗菌药物联合应用的抑菌效果;结晶紫染色法测定紫锥菊提取物单用和与抗菌药物联用对MDR S.aureus的BF形成表型的抑制效果;扫描电镜观察不同浓度紫锥菊提取物对MDR S.aureus的BF形成的影响;RT-PCR测定紫锥菊提取物对MDR S.aureus的BF形成相关基因mRNA相对表达量的影响;HE染色观察不同组别乳腺组织的病理变化;免疫组化切片染色观察不同组别乳腺组织的ZO-1和TLR-2的变化;RT-PCR测定不同组别乳腺组织中IL-1βmRNA相对表达量的变化。结果如下:1.紫锥菊提取物与克林霉素联用呈协同作用,与庆大霉素、强力霉素和硫酸头孢喹肟联用呈相加作用;紫锥菊提取物的单独应用和与抗菌药物联合应用均可极显著地抑制MDR S.aureus的BF形成（P<0.01）;MDR S.aureus的黏附能力随着紫锥菊提取物浓度的升高不断减弱,且菌体变形肿胀,并存在剂量依赖性;MDR S.aureus的BF形成相关基因为ica A、ica D、clf B和fnb B,经紫锥菊提取物作用后,MDR S.aureus的ica D mRNA相对表达量呈极显著下调（P<0.01）,clf B和fnb B mRNA相对表达量呈显著下调（P<0.05）,ica A mRNA相对表达量无明显变化（P>0.05）。2.与空白组相比,攻菌组的乳腺组织腺泡壁界限不清晰,腺泡上皮细胞排列散乱并有脱落现象,乳腺上皮细胞的ZO-1呈弱阳性反应,腺泡上皮细胞之间的紧密连接程度下降,乳腺间质内巨噬细胞的TLR-2呈强阳性反应,腺泡内充满炎性细胞,主要有中性粒细胞、巨噬细胞,IL-1βmRNA的相对表达量极显著地升高。紫锥菊提取物组和硫酸头孢喹肟组的乳腺腺泡壁界限清晰,腺泡上皮细胞排列整齐,腺泡内有淡染的乳汁,腺泡内仅有少量的炎性细胞浸润,小叶间隙仅存在少量的中性粒细胞浸润,两组的ZO-1均呈中等阳性反应,腺泡上皮细胞之间的紧密连接程度与空白组相同,都可以有效保护乳腺上皮屏障的完整性,紫锥菊提取物组可以极显著地降低IL-1βmRNA的相对表达量（P<0.01）,减弱乳腺组织的炎症反应。以上结果表明,紫锥菊提取物单独应用和与抗菌药物联用均可以极显著地抑制MDR S.aureus BF形成（P<0.01）,并具有剂量依赖性;紫锥菊提取物可以减弱由MDR S.aureus引起的小鼠乳腺组织的炎症反应,并有效保护乳腺腺泡上皮屏障的完整性。
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