脂质在肝脏堆积是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)发病的重要起因,会引发一系列的免疫应答和炎性反应推动单纯性脂肪肝(NAFL)向非酒精性脂肪性肝炎(NASH)发展。单纯性脂肪肝不需要药物治疗可通过调整饮食和生活方式得到缓解,单纯性脂肪肝进展为肝炎之后会增加心血管疾病和恶性肿瘤等的患病率,此时患者的治疗将会更加复杂,因此深入解析NAFL向NASH转化的过程有助于控制NAFLD的疾病进展。但是其中的具体机制并不明朗,本课题针对这个问题进行了探索。本课题采用Hep G2和THP-1经PMA诱导形成的巨噬细胞建立共培养体系并给予游离脂肪酸(FFAs)主要是油酸和棕榈酸来构建NAFLD细胞模型。预实验研究结果显示FFAs在肝细胞堆积会导致多种细胞器功能失调和细胞损伤并伴随一系列炎性因子的释放主要包括TNF-α、IL-18、IL-1β等。已知炎性因子IL-18、IL-1β可以通过炎性小体激活诱导释放,因此我们将目标聚焦于炎性小体的激活。并通过WB、qPCR、IF,流式以及基因敲除和过表达等方法对脂肪酸在肝细胞堆积诱导的炎性应答进行了深入的研究。结果表明,在NAFLD细胞模型中NLRC4炎性小体被激活并诱导焦亡。通过免疫荧光观察发现NLRC4炎性小体的激活伴随NLRC4从胞浆向线粒体的定位转移。敲低NLRC4之后IL-18、IL-1β表达下调,过表达NLRC4之后IL-18、IL-1β表达上调,说明IL-18、IL-1β的释放是由NLRC4炎性小体激活导致。在NAFLD细胞模型中敲低TNF-α后NLRC4及其下游蛋白IL-18、IL-1β的表达均下调,说明NLRC4炎性小体的激活受TNF-α调控。因此本课题得出结论肝细胞脂质堆积诱导NLRC4炎性小体的激活,释放炎性因子IL-18、IL-1β并启动焦亡,这一过程受TNF-α调控并伴随NLRC4的定位转移。