凡纳滨对虾与斑节对虾脂肪代谢胰脂酶(Pancreatic lipase)基因的克隆及其表达分析

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脂肪在对虾的肉质和鲜味的形成过程中具有重要作用。脂酶家族中的胰脂酶在人和动物的脂肪代谢中起着重要的作用。本研究利用16Sr RNA的克隆的方法对实验所需的凡纳滨对虾与斑节对虾进行了分子鉴定。然后通过克隆内参基因beta actin(β-actin)检测ds-cDNA的质量。利用RT-PCR(Reverse transcription PCR, RT-PCR)和RACE-PCR技术克隆了凡纳滨对虾、斑节对虾胰脂酶(Pancreatic lipase)基因全长cDNA序列,并研究了不同盐度处理下的组织表达,同时测定了不同盐度处理下脂肪代谢相关酶的活性变化。具体结果如下:(1)凡纳滨对虾胰脂酶(Pancreatic lipase)cDNA序列由1823个核苷酸组成,其开放阅读框(ORF)长度为1494bp编码497个氨基酸,推测其蛋白质分子量为54.688kD。其中5’非编码区(5’-UTR)为304bp3’非编码区(3’-UTR)为25bp。起始密码子位于305-307bp,终止密码子位于1799-1801bp。(2)斑节对虾胰脂酶(Pancreatic lipase)cDNA序列由1976个核苷酸组成,其开放阅读框(ORF)长度为1278bp编码425个氨基酸,推测其蛋白质分子量为46.768kD。其中5’非编码区(5’-UTR)为535bp,3’非编码区(3’-UTR)为163bp。起始密码子位于526-538bp,终止密码子位1814-1816bp。(3)采用实时荧光定量PCR技术研究了不同盐度处理下凡纳滨对虾胰脂酶(Pancreatic lipase)基因的组织表达,结果表明,不同盐度处理后胰脂酶在凡纳滨对虾肌肉组织和肝胰腺中均有表达,其中肝胰腺的相对表达量较高,为0.10±0.001-0.085±0.010,而肌肉组织内的表达量较低。盐度28‰时,肌肉组织和肝胰腺中表达量最高,盐度22‰时,肌肉组织和肝胰腺中的表达量最低。盐度为10‰、16‰、34‰、40‰时,其相对表达量无显著性差异(P>0.05)。(4)研究不同盐度处理的凡纳滨对虾部分脂肪相关酶活性影响,结果表明,养殖水体盐度对凡纳滨对虾总脂肪酶活力具有显著影响(P<0.05)。在盐度24‰-30‰和36‰-42‰时,凡纳滨对虾总脂肪酶活力随盐度升高而增强;在盐度18‰-24‰和30‰-36‰时,LPS、总脂肪酶活力随盐度升高而下降;当盐度为30‰时,凡纳滨对虾的总脂肪酶活力达到最大值。养殖水体的盐度对凡纳滨对虾的MDH酶活力无显著影响(P<0.05)。随养殖水体盐度变化,凡纳滨对虾的MDH酶活力没有显著变化,MDH酶在30‰的盐度时活力较高。
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