布氏杆菌(Brucella Blues)是革兰氏阴性需氧杆菌，可引起人畜共患的布氏杆菌病，给世界各国畜牧业造成了严重的经济损失，同时也给人类健康造成极大的危害。该病目前尚不能完全根治，所以预防和检测显得尤为重要。本研究采用改良热酚法制备纯化布氏杆菌M5株的脂多糖（LPS），检测细菌LPS免疫原性；纯化的细菌LPS免疫BALB/c小鼠，通过DOT-ELISA测定血清抗体效价。结果表明采用热酚法能获得较高纯度的细菌LPS，其免疫原性较高，DOT-ELISA检测的血清效价达到1:106，与全菌免疫原性接近。在此基础之上，将LPS免疫的BALB/c小鼠脾细胞和SP2/0细胞进行融合，制备杂交瘤细胞，采用间接ELISA法进行阳性筛选，经过三次筛选和3-4次细胞克隆化培养，获得四株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株，采用间接ELISA法分别测定其细胞上清抗体效价，分别达到1:104，1:105，1:105，1:105。对四株细胞的上清液进行Tricine-SDS-PAGE鉴定，上清中同时出现了细胞培养液中没有的蛋白，即为单克隆抗体目的蛋白。测定单克隆抗体的相对亲和力和稳定性，结果显示其相对亲和力分别为24.13μg/mL，24.65μg/mL，24.95μg/mL，23.16μg/mL，且具有良好的稳定性。对细胞上清采用硫酸铵盐析法初步纯化，再采用亲和层析法对单抗进一步纯化，纯化的蛋白进行效价测定和Tricine-SDS-PAGE鉴定，结果表明纯化后四株细胞的单抗效价略有降低，但仍可达1:104。电泳结果表明单抗的轻链分子量约为26ku，重链分子量约为37ku。本实验结果为布氏杆菌病检测方法的建立奠定了研究基础。