【摘 要】
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目的:试验旨在构建合适的哮喘模型,探究UBC13重组蛋白对小鼠支气管哮喘模型中Th2、Th17极化及相关通路的影响。方法:(1)支气管哮喘模型建立:24只BALB/c小鼠随机分为PBS组、LPS建模组、Al(OH)3建模组。两种建模组于0、7、14 d分别注射相应致敏液,21 d时以5%OVA溶液雾化激发,持续7 d,每次30 min。PBS组在相同时间点以PBS代替致敏液进行致敏和雾化。检测各组
【基金项目】
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山西省重点研发计划(201603D21109);
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目的:试验旨在构建合适的哮喘模型,探究UBC13重组蛋白对小鼠支气管哮喘模型中Th2、Th17极化及相关通路的影响。方法:(1)支气管哮喘模型建立:24只BALB/c小鼠随机分为PBS组、LPS建模组、Al(OH)3建模组。两种建模组于0、7、14 d分别注射相应致敏液,21 d时以5%OVA溶液雾化激发,持续7 d,每次30 min。PBS组在相同时间点以PBS代替致敏液进行致敏和雾化。检测各组小鼠血清IgE含量变化,肺脏病理切片的改变,及CD4+T淋巴细胞的影响,确定建模是否成功。(2)UBC13重组蛋白对支气管哮喘模型影响:根据第一部分LPS建模方式,将24只BALB/c小鼠随机分为PBS组、哮喘模型组、UBC13对照组、阳性对照组(布地奈德)。记录各组小鼠体重变化情况,通过ELISA法检测小鼠血清IgE的含量,HE和PAS染色法观察肺脏病理组织学观察切片,实时荧光定量PCR和ELISA检测Th2、Th17细胞因子的表达量,免疫组织化学检测转录因子GATA3和RORγt的表达量,Western Blot检测NF-κB信号通路中关键蛋白IκBα,p-IκBα,p65的表达量。结果:(1)HE和PAS染色结果显示两种模型均出现气道炎症聚集,气道平滑肌变厚,黏液分泌现象;与PBS组相比,两种模型血清IgE含量均极显著升高(P<0.001),CD4+T淋巴细胞表达量均显著增加(P<0.05)。(2)ELISA检测血清IgE含量显示,与PBS组相比,模型组和UBC13蛋白组IgE含量极显著升高(P<0.01),与模型组相比,蛋白组和阳性对照组IgE含量均显著下降(P<0.01);模型组肺脏病理切片结果显示气道炎症聚集,大量黏液分泌,UBC13组与阳性组炎症和黏液分泌现象明显改善。q PCR试验结果显示,与PBS组相比,模型组肺组织中Th2细胞因子IL-4、IL-5、IL-13 m RNA表达量均显著升高(P<0.01),Th17细胞因子IL-1β、IL-6、IL-17A、IL-23 m RNA表达量均极显著升高(P<0.001);与模型组相比,UBC13组和阳性对照组IL-1β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-13、IL-23均显著下降(P<0.05);ELISA结果显示,与PBS组相比,各组肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-5含量均极显著上升(P<0.001),IL-17A含量显著上升(P<0.01);与模型组相比,UBC13组和阳性组IL-4、IL-5含量均显著下降(P<0.001),IL-17A的含量无显著差异(P>0.05)。免疫组织化学结果显示,与PBS组相比,模型组中GATA3和RORγt表达量均显著增加(P<0.01),与模型组相比,UBC13组和阳性组均显著减少(P<0.05)。Western Blot结果显示,与PBS组相比,模型组胞浆p-IκBα和胞核p65表达量显著升高(P<0.01),胞浆IκBα和p65表达量极显著降低(P<0.01),与模型组相比,UBC13组与阳性组胞浆p-IκBα和胞核p65表达量显著降低(P<0.01),胞浆IκBα和p65表达量显著升高(P<0.01)。结论:以LPS为佐剂构建的哮喘模型程度更重,中性黏液分泌现象明显更符合下一步试验需求;UBC13蛋白可通过抑制NF-κB信号通路的激活减轻哮喘模型气道炎症聚集,影响Th2、Th17细胞的极化,对哮喘模型气道炎症有一定治疗作用。
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