银杏达莫对梗阻性肾病大鼠肾间质纤维化作用的实验研究

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目的:观察转化生长因子β1(transforming growth factot-beta1,TGF-β1)在梗阻性肾病大鼠肾间质纤维化过程中的表达,研究药物银杏达莫对肾间质纤维化的防治作用及其作用机制。方法:将45只健康6-8周龄的SD雄性大鼠随机分为三组,每组15只:假手术组即对照组(打开大鼠腹腔只分离左侧输尿管但不结扎);模型组(打开大鼠腹腔结扎左侧输尿管,建立梗阻性肾病动物模型);药物干预组(建立梗阻性肾病动物模型后给予药物银杏达莫注射液12.5ml/kg腹腔注射)。于术后2W、3W、4W分别断颈处死各组中的5只大鼠,处死前用代谢笼收集24小时尿量,做24小时尿蛋白定量检测,并行心脏采血1ml用全自动生化分析仪检测血尿素氮和肌酐水平;肉眼观察肾脏的大体结构改变,行苏木素—伊红(HE)染色和Masson染色光镜观察肾间质的病理学改变,间质纤维化半定量分析借助于Motic Med 6.0迈克奥迪数码医学图象分析系统完成,电子显微镜观察肾间质的超微结构变化;用免疫组织化学半定量分析的方法测定TGF-β1在各组中的表达情况。结果:与假手术组相比,模型组大鼠左侧肾脏明显肿大,颜色苍白,肾皮质变薄,皮髓质分界模糊,肾盂、肾盏极度扩张,其中充满尿液,并随着输尿管梗阻时限的延长而加重,干预组上述变化轻微。HE染色显示:输尿管梗阻后2周肾间质可见有较多炎症细胞浸润,弥漫性肾小管空泡变性,部分小管灶状扩张、萎缩、坏死,轻度间质纤维化,术后3周、4周上述变化逐渐加重;银杏达莫组上述改变有所减轻;假手术组术后2周也可见少量炎症细胞浸润,4周可见间质纤维化改变。Masson染色显示:假手术组可见炎细胞浸润,间质散在黄染;模型组见大量炎症细胞,间质区大面积黄染,并随梗阻时间的延长而加重,银杏达莫干预后黄染区面积明显减小。电子显微镜可见肾小管基膜增厚,小管上皮细胞内大量肿胀的线粒体,小管间质大量炎症细胞浸润和纤维组织形成,模型组最显著,干预组次之。免疫组织化学分析显示,TGF-β1的升高与肾小管间质纤维化的组织学改变相平行,与肾间质损害的评分之间无显著相关性,(β=-0.197,P=0.639);TGF-β1的表达水平肾小管间质黄染面积成显著正相关(β=0.935,P=0.000)。各组大鼠24小时尿蛋白定量,组间两两比较差异无显著。与假手术组比较,模型组大鼠术后2周时血尿素氮和肌酐水平明显升高,第3周时较第2周略降低,第4周时呈现继续降低趋势,但仍明显高于假手术组。银杏达莫干预组在手术后2周、3周、4周血尿素氮和肌酐水平均升高,但较模型组缓慢。结论:大鼠单侧输尿管结扎是肾间质纤维化的理想动物模型;转化生长因子是肾脏间质纤维化的重要致病因子之一,且其表达水平的高低一定程度上反映了肾间质纤维化的严重程度;银杏达莫可以明显延缓肾脏间质纤维化的的进展,其作用机制之一是抑制TGF-β1的表达。
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