黑心菊花瓣中黄酮类化合物的提取及抗氧化活性研究

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黑心菊(Rudbeckia hirta)又名黑心花,为菊科,金光菊属,种植广泛。本文采用超声波辅助法对黑心菊花瓣中总黄酮的提取工艺进行研究,采用硅胶柱色谱法对黄酮类化合物进行分离纯化,并采用铁氰化钾法、DPPH法、水杨酸-硫酸亚铁法和邻苯三酚自氧化法测定了黑心菊花瓣中黄酮类化合物的抗氧化活性。具体研究内容如下:1.超声波辅助法提取黑心菊花瓣中总黄酮,通过单因素实验得出的最佳提取条件为:乙醇浓度70%,液固比20:1,提取时间50mmin,提取温度为50℃。2.利用响应面法优化提取条件,以乙醇浓度、液固比、提取时间为自变量,以黄酮得率为响应值,根据Box-Benhnken中心组合设计原理,研究三个自变量及其交互作用对黄酮得率的影响。在提取温度为50℃的条件下,响应面法优化的最佳条件为:乙醇浓度71%、液固比22:1(mL/g)、提取时间52min。在此条件下,黄酮得率均值为4.719%,与理论预测值4.721%非常接近。3.黑心菊花瓣乙醇提取物依次采用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取,萃取液经浓缩后,利用硅胶柱色谱法对黑心菊花瓣乙酸乙酯相中的黄酮类化合物进行进一步的分离纯化,以氯仿/甲醇/甲酸为洗脱剂,利用1H-NMR、13C-NMR及HMBC光谱学技术对化合物进行结构鉴定,结果共分离得到3个单体化合物,分别为Eupatolitin3-O-β-D-(6"-O-乙酰基)-吡喃葡萄糖苷(Ⅰ)、3,5,3’,4’-四羟基-6,7-二甲氧基黄酮(Ⅱ)和Eupatolitin3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅲ),均为首次从黑心菊中分离得到,其中化合物Ⅰ为新化合物,首次分离得到。4.以Vc为对照,采用铁氰化钾法测定黑心菊花瓣乙醇提取物及各萃取相的还原能力,实验结果表明,各部分均具有一定的还原力,采用DPPH法、水杨酸-硫酸亚铁法和邻苯三酚自氧化法分别测定黑心菊花瓣乙醇提取物、各萃取相及黄酮单体化合物对DPPH自由基、羟自由基及超氧阴离子自由基的清除作用,四种方法均表明,乙酸乙酯相和正丁醇相的抗氧化活性最强,同时,单体化合物Ⅰ、Ⅲ对自由基的清除作用也较强。
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