损伤血瘀证大鼠血清TNF-α、β及骨骼肌细胞凋亡的变化研究

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目的:课题从损伤大鼠血清TNF-α与TNF-β以及骨骼肌细胞凋亡变化入手,观察TNF-α与TNF-β以及骨骼肌细胞凋亡在不同时相的变化规律,从而分析TNF-α、TNF-β、骨骼肌细胞凋亡变化的特征,部分揭示损伤血瘀证骨骼肌细胞的病理过程。方法:80只Wistar大鼠SPF级别,体重200-250g,每组雌雄各半随机分为8组。随机设立对照组C组(n=10只,下同),伤后1小时组(1H组),伤后12小时组(12H组),伤后1天组(1D组),伤后3天组(3D组),伤后5天组(5D组),伤后7天组(7D组),伤后14天组(14D组),采用“定量化重力击打法”[1]造成大鼠左大腿内群肌肉损伤,并选取大鼠血清以及左大腿内群肌肉,用ELISA法测定各组TNF-α与TNF-β的变化。用TUNEL法测定各组的骨骼肌细胞凋亡情况。应用SPSS17.0统计软件进行相关的统计方法分析。结果:1.在骨骼肌细胞凋亡变化方面,1D组、3D组、5D组、7D组、14D组比C组有极显著升高(P<0.01)。3D组、5D组、7D组、14D组比1H组有极显著升高(P<0.01),1D组比1H组有显著升高(P<0.05)。3D组、5D组、7D组、14D组比12H组有极显著升高(P<0.01),1D组比12H组有显著升高(P<0.05)。1D组比C组有极显著升高(P<0.01),比1H组、12H组有显著升高(P<0.05)。7D组比C组、1H组、12H组有极显著升高(P<0.01),比1D组有显著升高(P<0.05)。2.在TNF-α数量变化方面,12H组比C组有极显著升高(P<0.01),1H组比C组有显著升高(P<0.05)。1H组比C组、14D组有显著升高(P<0.05)。12H组比C组、14D组有极显著升高(P<0.01),12H组比1D组、5D组、7D组TNF-α数量有显著升高(P<0.05)。3.在TNF-β数量变化方面,12H组、1D组比C组有极显著升高(P<0.01),1H组比C组有显著升高(P<0.05)。4.TNF-α与TNF-β在本次研究中相关性低(P≥0.05);TNF-α与TNF-β的比值与反比值无明显统计学差异(P>0.05)。结论:1.损伤血瘀证病理过程中骨骼肌细胞凋亡的变化在损伤后24小时最为显著。2.损伤血瘀证中大鼠血清TNF-α的波动变化主要发生在损伤后24小时之内,损伤后12小时TNF-α的测试值达到高峰;可能提示TNF-α是损伤血瘀证骨骼肌细胞凋亡发生的诱导因素之一。3.损伤血瘀证中大鼠血清TNF-β的上升波动变化主要发生在24小时之内;这可能也是激发损伤血瘀证骨骼肌细胞凋亡的重要因素。4.TNF-α与TNF-β之间未呈现线性相关关系,其比值与反比值在损伤过程中的不同时间点未产生显著的变化,即保持相对稳态,说明不同时间点TNF-α与TNF-β的偏移并没有打破二者之间的比值平衡关系,这有可能类似于中医所说的阴阳平衡关系,因此阴性结论也有进一步科学探索的价值。
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