[目的]针对目前牛奶生产者的用药复杂性及乳制品食用安全性,建立并优化一种能够同时快速检测牛奶中多种抗菌抗病毒药物及甾体固醇类激素的分析检测方法已迫在眉睫,如本研究中针对的磺胺类、喹诺酮类、四环素类及甾体激素类药物。该方法不仅可以为日常分析检测工作提供借鉴,而且可以为国家制定相关食品安全限量标准及检测方法提供参考。[方法]首先建立并优化了样品的前处理方法,称取5g牛奶试样于50 mL离心管中,加入5 mLNa2EDTA缓冲溶液(PH=6),涡旋混匀1 min,45℃水浴超声3 min,加入10 mL 5%乙酸-乙腈溶液和2 g氯化钠、4g无水Na2SO4,涡旋混匀1 min,超声提取5 min,5000 r/min高速离心5 min,移取上清液待净化。移取上清液于10 mL具刻度玻璃管中,40℃下氮吹浓缩至近干,然后加入5 mL缓冲溶液溶解稀释,待上样。HLB固相萃取小柱依次经6 mL甲醇、6 mL水、3 mL缓冲溶液活化,取稀释液上样,待样液滴至6 mL水淋洗,正压挤干或负压抽干小柱,8 mL洗脱液(甲醇：乙酸乙酯=3：7)洗脱,收集洗脱液,40℃下氮气浓缩吹干,1 mL甲醇定容,涡旋混匀1 min,过0.221.tm滤膜,待分析。其次,建立并优化了超高效液相色谱-质谱法定性定量检测方法。[结果]该方法中目标化合物的检出限在0.5μg/kg-2.0 μg/kg,混合标准样品在2μg/kg-100 μg/kg范围内线性良好,鲜牛奶和普通纯牛奶中各兽类药物在定量限、5倍定量限和10倍定量限三个添加浓度水平的平均回收率为61.6%118.0%和62.9%-119.2%,组内RSD分别为2.6%-13.4%和2.5%-13.1%,组间RSD为6.4%-14.5%和5.8%-14.2%。[结论]采用实验建立的分析检测方法,对实际样品进行分析检测,基本可以满足牛奶样品中四类共25种兽类药物的快速分析检测,且具有较高的灵敏度。