肌萎缩侧索硬化脊髓内源性神经前体细胞的变化及其调控因子HoxB表达改变的研究

来源 :南昌大学医学院 南昌大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ouyang
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目的:采用G93A-SOD1转基因小鼠作为肌萎缩侧索硬化(ALS)动物模型,观察分析正常生理条件下和ALS病理条件下成年小鼠脊髓神经前体细胞(NPCs)的分布、增殖、迁移途径和分化方向以及HoxB9的表达情况。方法:构建B6SJL-Tg(SOD1*G93A)1Gur/NJU转基因小鼠动物模型,用PCR技术检测和筛选转基因小鼠动物模型。采用荧光免疫组织化学双标记技术,分别标记NPCs、神经元细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞、HoxB9基因表达的细胞。每一解剖区同时进行双重荧光免疫组织化学染色,在显微镜下观察,并用图像处理技术将不同染色的阳性细胞两两叠加成像,观察分析阳性细胞分布特征,计算各种阳性细胞数。并统计分析相关解剖区NPCs、神经元细胞和神经胶质细胞的数量及HoxB基因家族表达细胞类型和表达量的变化。结果:1、正常成年小鼠脊髓组织内存在NPCs,并主要分布于中央管周围区域,而在灰质区域内少量散在分布。不同节段间中央管周围区域的NPCs在数量上存在颈段>腰段>胸段的规律。2、在ALS病理状态下发病后的小鼠脊髓内存在NPCs的大量增殖,且在各个解剖区域均呈现出进展组>起病组>未发病组的规律。3、在ALS病理状态下小鼠脊髓灰质(灰质前角、后角、侧角区域)内增殖的NPCs与Anti-GFAP antibody存在共免疫反应性。提示增殖的NPCs主要分化为星形胶质细胞。4、在正常和ALS病理状态下的小鼠脊髓内均不存在HoxB9基因表达,提示在成年小鼠脊髓内HoxB9基因已不再表达,且在ALS病理条件下不能激活其表达。结论:1、在正常生理条件下成年小鼠脊髓内NPCs主要分布于中央管周围区域内,而在ALS病理状态下,可刺激成年小鼠脊髓内NPCs随疾病的进展大量增殖并向着损伤区域迁移,并且灰质区域内增殖的NPCs大多分化为星形胶质细胞。2、HoxB9基因在正常及ALS成年小鼠脊髓内均不再表达。
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