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目的:研究RELM-β调控Ca2+/Calcineurin/NFATc3信号通路对低氧性人肺动脉平滑肌(HPASMCs)增殖相关机制。通过干预RELM-β基因表达,观察Ca2+/Calcineurin/NFATc3信号通路及HPASMCs增殖的影响。探讨在HPASMCs加入信号通路抑制剂后,观察Calcineurin、NFATc3的表达及HPASMCs增殖情况。方法:(1)第一部分实验分别在常氧和低氧条件下及干预RELM-β基因表达后,观察RELM-β表达的情况及RELM-β对Ca2+/Calcineurin/NFATc3信号通路和HPASMCs增殖影响:此部分实验共分为8组:(1)、常氧组(2)、低氧组(3)、慢病毒空载常氧组(4)慢病毒空载低氧组(5)慢病毒沉默常氧组(6)、慢病毒沉默低氧组(7)、慢病毒过表达常氧组(8)、慢病毒过表达低氧组本实验采用处于对数生长期的人肺动脉平滑肌细胞,在10%FBS+1%双抗培养基中培养24小时后使细胞周期达到同步化后,使用实时荧光定量核酸扩增检测(Quantitative real time-PCR)及免疫蛋白印记(Western blot)分别检测HPASMCs中RELM-β、Calcineurin、NFATc3 mRNA和蛋白的表达,采用EDU试剂盒检测HPASMCs的增殖情况。(2)第二部分实验探索RELM-β调控Ca2+/Calcineurin/NFATc3信号通路导致HPASMCs增殖相关机制:此部分实验分为4组(1)、对照组(2)、生理盐水+重组人RELM-β蛋白组(3)、钙离子螯合剂BAPTA-AM+重组人RELM-β蛋白组(4)、Calcineurin/NFAT抑制剂环孢素A+重组人RELM-β蛋白组用QT-PCR和Western blot两种方法分别检测Calcineurin、NFATc3mRNA和蛋白表达情况,用EDU试剂盒检测HPASMCs的增殖情况。结果:第一部分实验:低氧对RELM-β表达水平及HPASMCs增殖的影响QT-PCR和Western blot检测结果显示:与常氧组比较,低氧组中RELM-β、Calcineurin、NFATc3的mRNA及蛋白表达均增加(P<0.05);与慢病毒空载常氧组比较,慢病毒沉默常氧组中RELM-β、Calcineurin、NFATc3的mRNA及蛋白表达均降低(P<0.05);与慢病毒沉默常氧组比较,慢病毒沉默低氧组中RELM-β、Calcineurin、NFATc3的mRNA及蛋白表达无显著变化(P>0.05);与慢病毒空载低氧组比较,慢病毒沉默低氧组中RELM-β、Calcineurin、NFATc3的mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05);与慢病毒空载常氧组比较,慢病毒空载低氧组中RELM-β、Calcineurin、NFATc3的mRNA及蛋白表达均增高(P<0.05);与慢病毒空载常氧组比较,慢病毒过表达常氧组中RELM-β、Calcineurin、NFATc3的mRNA及蛋白表达均增加(P<0.05);与慢病毒沉默常氧组比较,慢病毒过表达常氧组中RELM-β、Calcineurin、NFATc3的mRNA及蛋白表达均增加(P<0.05);与慢病毒过表达常氧组比较,慢病毒过表达低氧组中RELM-β、Calcineurin、NFATc3的mRNA及蛋白表达均增加(P<0.05);与慢病毒沉默低氧组比较,慢病毒过表达低氧组中RELM-β、Calcineurin、NFATc3的mRNA及蛋白表达均增加(P<0.05);与慢病毒空载低氧组比较,慢病毒过表达低氧组中RELM-β、Calcineurin、NFATc3的mRNA及蛋白表达均增加(P<0.05)。EDU免疫荧光检测结果显示:与常氧组比较,低氧组细胞增殖增加(P<0.05);与慢病毒空载常氧组比较,慢病毒沉默常氧组细胞增殖减少(P<0.05);与慢病毒空载低氧组比较,慢病毒沉默低氧组细胞增殖明显降低(P<0.05);与慢病毒沉默常氧组比较,慢病毒沉默低氧组细胞增殖无显著变化(P>0.05);与慢病毒空载常氧组比较,慢病毒过表达常氧组细胞增殖增加(P<0.05);与慢病毒过表达常氧组,慢病毒过表达低氧组细胞增殖增加(P<0.01)。第二部分实验:在HPASMCs中加入重组人RELM-β蛋白及通路抑制剂,探究RELM-β调节Ca2+/Calcineurin/NFATc3信号通路导致HPASMCs增殖相关QT-PCR和Western blot结果显示:与对照组比较,加生理盐水再加重组蛋白组中的Calcineurin、NFATc3的mRNA及蛋白表达水平明显增加(P<0.01);与加生理盐水再加重组蛋白组比较,加钙离子螯合剂BAPTA-AM后再加重组蛋白组中的Calcineurin、NFATc3的mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.01);与加生理盐水再加重组蛋白组比较,加Calcineurin/NFAT抑制剂环孢素A后再加重组蛋白组中Calcineurin、NFATc3的mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.01)。EDU免疫荧光结果显示:与对照组比较,加生理盐水再加重组蛋白组细胞增殖增加(P<0.01);与加生理盐水再加重组蛋白组比较,加钙离子螯合剂BAPTA-AM后再加重组蛋白组细胞增殖均减少(P<0.01);与加生理盐水再加重组蛋白组比较,加Calcineurin/NFAT抑制剂环孢素A后加重组蛋白组细胞增殖减少(P<0.01)。结论:1、低氧条件下,RELM-β、Calcineurin、NFATc3的表达增加,并且可促进HPASMCs增殖;2、RELM-β可能通过调节Ca2+/Calcineurin/NFATc3信号通路导致HPAS M-Cs增殖。