胰岛素是治疗糖尿病的特效药物，C肽是胰岛素A链和B链之间的连接肽。在研究胰岛素的结构和生物功能的关系中，过去人们一直认为C肽无生物活性，仅在胰岛素二硫键正确配对时起作用，但近年很多研究肯定C肽具有多种生物学作用。 表达重组人胰岛素及C肽的毕赤酵母菌株构建由本实验室完成。本文利用已构建好的菌株，对分泌表达、高密度发酵和纯化工艺进行研究，得到重组人胰岛素原类似物，经酶切后获得重组人胰岛素及C肽。 在论文中，考察了不同配方的三种培养基，找出了最适合本菌株生长的培养基；同时对影响分泌表达的发酵条件和诱导条件进行优化，当诱导pH为5、甲醇浓度保持在1％以及（NH₄）₂SO₄浓度9g/L、PTM添加量2mL／L、甘油浓度40g/L时，目的蛋白产量最大。多次10L发酵罐放大实验中，目的蛋白产量是摇瓶培养的1.5-2倍。 用中空纤维膜超滤截流目的蛋白，可除掉50％以上的杂蛋白，同时还可以对发酵液进行除盐和初步浓缩，最终收率基本保持在30％～50％之间，并且对活性无破坏；文中还对SP Sepharose Fast Flow强阳离子交换柱、CM Sepharose Fast Flow弱阳离子交换柱、DEAE-Sepharose Fast Flow弱阴离子交换柱对目的蛋白的吸附进行考察，确定了每种交换柱的最适pH值及洗脱NaCl浓度；其中SP-FF阳离子交换柱吸附目的蛋白效果最