水稻黑条矮缩病毒结构蛋白P8和P10的功能研究

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水稻黑条矮缩病毒(Rice black、streaked dwar7rvirus,RBSDV)是呼肠孤病毒科(Reoviridae),斐济病毒属(Fijivirus)的成员。至2001年,病毒的基因组已全部完成克隆、测序,但是对其所编码蛋白的功能还知之甚少。 间接免疫荧光和绿色荧光蛋白(GFP)融合定位实验结果表明RBSDV P8蛋白专一地定位于昆虫和烟草细胞核中,并且该蛋白N末端包含推测碱性核定位信号(NLS)的第1~40位氨基酸片段对于其核定位能力是必要的。接着,采用基于GAL4 DNA结合结构域的报告系统研究了P8蛋白在植物细胞中的转录调控活性。结果表明P8蛋白在烟草悬浮细胞(Bright Yellow-2,BY-2)中可以通过一个异源的DNA结合结构域对相应嵌合启动子的转录水平产生有效的抑制。此外,酵母双杂交实验的结果显示P8蛋白同时具有很强的自相互作用能力,并且当野生型P8与核定位活性缺失的P8AN40-GFP融合蛋白共同在昆虫细胞中表达时,前者可以将后者共转运至细胞核中,进一步暗示P8蛋白可能在体内形成寡聚体复合物。蛋白化学交联实验和非变性PAGE分析结果证明纯化的P8蛋白在溶液中以稳定的同源二聚体形式存在,显示了与许多转录调控因子相似的特性。 综上所述,已有结果显示RBSDV P8是一个在植物细胞中具有转录抑制活性的核定位蛋白,它很可能通过调节重要的宿主细胞基因的表达来发挥其在病毒生命活动中的作用。 另一方面,酵母双杂交和体外far-western blotting实验结果显示RBSDV P10蛋白也具有自身相互作用,并且其N末端1~230位氨基酸片段为介导自相互作用的主要区域。蛋白化学交联实验结果进一步表明完整的P10蛋白在溶液中可以自发地形成三聚体,显示了预期的呼肠孤病毒第二层蛋白壳单位所具有的保守三聚化特性。最后,将RBSDV P10蛋白的预测二级结构与其它呼肠孤病毒类似蛋白的二级结构进行了比较,并基于以上实验结果对P10蛋白三聚化的关键区域进行了讨论。
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