目的:本研究通过建立体外染毒大鼠血管平滑肌细胞模型,观察低浓度铅对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响,并探索AMPK/mTOR/FoxO3a信号通路在其中的作用。方法:选取体重100-120g的雄性SD大鼠,在无菌环境下分离其腹主动脉,采用组织贴块法培养原代血管平滑肌细胞。本实验分为0(对照组)、0.1组(铅染毒低剂量0.1μM)、1.0组(铅染毒高剂量1.0μM)、0.1+R(雷帕霉素)组、R组、0.1+CC(AMPK抑制剂)组、CC组。通过c ck8细胞增殖实验和划痕实验检测血管平滑肌细胞增殖、迁移的能力;使用荧光显微镜检测FoxO3a在细胞核内的定位及细胞骨架的形态;采用W estern Blot法检测细胞中PCNA、MMP-2、MMP-9、mTOR、p-mTOR、AMPK、p-AMPK蛋白的表达水平;采用SPSS 21.0软件对数据进行统计分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.cck8细胞增殖实验和划痕实验显示铅可诱导血管平滑肌细胞发生增殖、迁移,且低剂量组增殖、迁移最明显;2.Western Blot法检测增殖迁移相关蛋白PCNA、MMP-2、MMP-9,发现低剂量组蛋白含量均显著升高;3.免疫荧光结果显示低剂量铅可使F-actin聚集、增粗;4.免疫荧光结果显示低剂量铅可使FoxO3a发生核转位,由细胞质转移到细胞核中;5.加入雷帕霉素后FoxO3a定位于细胞质中,核转位被抑制,F-actin排列松散、肌丝细小,PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达含量明显降低,细胞增殖、迁移被抑制;6.加入AMPK抑制剂后p-mTOR含量升高,FoxO3a发生核转位,定位于细胞核中,F-actin呈束状排列,荧光强度增高,PCNA和MMP-9蛋白含量升高,细胞发生增殖、迁移。结论:低剂量铅可诱导血管平滑肌细胞发生增殖和迁移,可能与铅抑制AMPK磷酸化有关。铅抑制AMPK磷酸化使p-mTOR的表达增加,调控下游蛋白FoxO3a发生核转位,从而使细胞骨架应力纤维增粗,同时细胞增殖的标志性蛋白PCNA和迁移标志蛋白MMP-2、MMP-9表达含量增高,细胞发生增殖、迁移。综上,铅通过AMPK/mTOR/FoxO3a信号通路诱导血管平滑肌细胞增殖、迁移。