【摘 要】
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以小鼠体细胞突变的时空控制将易于基因功能的研究和人类疾病动物模型的建立.为了能在肝脏获得以时空方式发生的、预定的遗传修饰,一个可选择途径就是建立肝细胞特异表达依赖
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以小鼠体细胞突变的时空控制将易于基因功能的研究和人类疾病动物模型的建立.为了能在肝脏获得以时空方式发生的、预定的遗传修饰,一个可选择途径就是建立肝细胞特异表达依赖配体诱导的Cre重组酶转基因小鼠.为此,该研究利用DNA重组,PCR,RT-PCR,Southern blot,组化染色和显微操作等分子生物学技术,来构建肝细胞特异表达嵌合体,Cre-ERt重组酶的载体,制备肝细胞特异表达嵌合体Cre重组酶的转基因小鼠及为检测Cre重组酶活性的报告小鼠.我们已成功构建了肝细胞特异表达嵌合体Cre-ERt重组酶的构件;在ZAP报告细胞中证实了Tamoxifen可诱导Cre介导重组,从而激活稳定整合的hAP基因;携带有双报告基因的ZAP细胞株为检测Cre介导重组活性提供了可靠便利的检测体系.我们又分别获得了2个在肝细胞特异表达Cre-ERt转基因小鼠3个为检测Cre重组模式的ZAP报告小鼠品系.目前,为了检测我们所建的2个表达Cre-ERt转基因小鼠品系的重组特征,这些小鼠正与Rosa26报告小鼠(Orkin教授惠赠)以及ZAP报告小鼠进行杂交,分析工作正在进行.这些工作将为实现在肝组织以时间方式控制基因修饰打下基础.
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