川麦冬多糖的质量分析及其益生元活性研究

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麦冬Ophiopogon japonicus是中国传统的药食两用药材,具有养阴生津、润肺消火的功效,是滋阴生津的要药,可用于肺燥干咳,虚劳咳嗽,津伤口渴,心烦失眠,内热消渴,肠燥便秘,白喉。现代研究表明,麦冬主要含有麦冬多糖、麦冬皂苷和麦冬黄酮等功效成分,其中麦冬多糖是一种果聚糖,相关化学结构和提取工艺研究报道较多,但相关药理作用机制尚有待深入研究。根据相关文献资料,我们推测麦冬多糖的药理机制可能主要通过益生元作用而改善肠道菌群平衡作用,进而发挥降血糖、益气养阴等功效。本文以四川绵阳的川麦冬道地药材为研究对象,对麦冬多糖的质量分析及其益生元活性方面进行研究,为麦冬的深入开发应用提供科学参考依据。本文首先对川麦冬的多糖类成分进行分离纯化和结构分析。通过水提、AB-8大孔树脂吸附除杂的方法获得麦冬多糖MDP-E,再经分级醇沉结合凝胶柱层析的纯化步骤得到多糖主要组分MDP-S1。经高效分子排阻色谱法(HPSEC)测试,MDP-S1为相对分子量19.2kD;全水解样品分析其单糖组成主要为果糖和葡萄糖(约19.9:1);结合1H、13C-NMR综合分析,确定MD-S1主链主要是2→1及2→6连接的β-果糖组成,可能在还原末端存在α-D-葡萄糖。进一步研究建立川麦冬多糖的总糖含量测定方法,为该药材的质量标准研究提供参考。采用蒽酮-硫酸显色的紫外-可见分光光度法,以果糖为对照品建立麦冬多糖含量测定方法,果糖的线性回归方程y=7.3449x+0.0165(r2=0.9926),表明果糖在0.01014-0.1014 mg/mL范围内线性关系良好;精密度、重现性、稳定性、回收率等实验研究结果表明方法学可行。测定川麦冬中总糖含量按果糖计为38.47%,按药材干品计应为42.51%。此外,结合前期麦冬多糖的HPSEC分析方法,可对麦冬总糖中的多糖和单糖/寡糖组成进行特征谱分析,以对麦冬药材中的多糖糖类组分进行质量控制。近期研究认为,肠道菌群的动态平衡存在个体差异,受机体原殖菌、膳食营养、机体健康/疾病状态等多种因素影响,但具有一定规律性。中草药中的植物多糖类物质作为常见的膳食纤维,通过益生元作用而发挥功效。本次实验通过麦冬多糖MDP-E体外培养正常大鼠肠道菌群,和空白对照组对照比较乳酸杆菌、双歧杆菌、肠球菌和大肠杆菌数目,结果发现:(1)川麦冬多糖对有益菌双歧杆菌、乳酸杆菌的生长表现为显著促进作用;(2)川麦冬多糖对条件致病菌大肠杆菌、肠球菌的生长无显著影响;(3)以B/E和L/E值为指标,进一步证明川麦冬多糖对大鼠肠道内双歧杆菌、乳酸杆菌菌群比重有显著提高。结合文献研究结果,我们认为,麦冬多糖中富含的果聚糖具有益生元作用,主要通过促进乳酸杆菌和双歧杆菌数增殖发挥作用;对大肠杆菌和链球菌无直接影响,但可通过体内的竞争性调节作用(B/E、L/E)发挥降糖、调脂等作用,调节疾病状态的微生态恢复正常,麦冬多糖可能是麦冬生津润肺、养阴清热的主要药效物质之一。
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