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研究背景和目的以全球范围而言，肺癌是在癌症死亡率中占主要地位的癌症类型，85%以上的肺癌为非小细胞肺癌（non-smallcelllungcancer，NSCLC），手术治疗是其首选的治疗方法，但术后远期生存率持续＜15%。因此，探索能提供有效治疗的靶分子是目前研究NSCLC的重要方向。吉非替尼(Gefitinib，又称Iressa)已被20多个国家批准用于治疗晚期NSCLC，属于表皮生长因子受体(Epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosinekinaseinhibitor，TKI)的一种。但近来研究指出，几乎所有原先对吉非替尼治疗有效的NSCLC患者在经过一段时间（6-12个月）的缓解期后出现疾病进展，即获得性耐药。在此基础上，研究者认为，在临床上急需更加针对、更有效的策略来逆转药物耐受的现象。STAT3（signaltransducersandactivatorsoftranscription3，信号转录传导子与激活子3）是EGFR下游信号通路JAK2-STAT3的关键因子，它的持续激活可使肿瘤细胞中细胞周期调控因子和抗凋亡蛋白表达上调，从而促进恶性肿瘤的异常增殖和转化，并在多种类型癌症的发生发展中起重要作用。虽然目前已有文献报道STAT3蛋白，尤其是磷酸化的STAT3与其目的基因在某种耐药细胞中异常激活或过度表达，但STAT3蛋白是否参与NSCLC对吉非替尼的耐药及其耐药的具体机制仍不清楚，抑制STAT3的活化如何能够增强NSCLC对吉非替尼的敏感性还有待进一步探索。研究方法1.CCK-8方法检测吉非替尼耐药的NSCLC细胞H1975和敏感的PC9细胞经不同浓度吉非替尼处理后肿瘤细胞抑制率的变化，Westernblot方法检测两种细胞中STAT3蛋白的表达水平。2.不同浓度STAT3通路抑制剂AG490或特异性抑制剂JSI-124(CucurbitacinI，葫芦素)处理H1975细胞后，用Westernblot和RT-PCR方法检测STAT3和相关基因的蛋白、mRNA表达水平的变化。CCK-8法检测经AG490或JSI-124处理的H1975细胞对吉非替尼药物敏感性的变化。流式细胞仪法检测经不同方式处理后H1975细胞凋亡水平的改变。3.不同浓度的STAT3特异性抑制剂JSI-124处理H1975细胞后，Westernblot和RT-PCR方法检测多药耐药蛋白MDR1的蛋白表达水平及mRNA表达水平的变化。研究结果1.CCK-8结果显示对吉非替尼敏感的PC9细胞的细胞抑制率高于耐药的H1975细胞，Westernblot结果显示H1975细胞中磷酸化STAT3的蛋白表达水平明显高于PC9细胞。2.不同浓度STAT3通路抑制剂AG490或特异性抑制剂JSI-124处理H1975细胞后，Westernblot结果示磷酸化STAT3的蛋白表达水平随抑制剂浓度的增加而减少，凋亡蛋白BCL-2的蛋白表达水平也随之下降，RT-PCR示STAT3和细胞增殖因子cyclinD1的mRNA水平也随着抑制浓度的加大而逐渐减少。CCK-8示JSI-124处理的H1975细胞对吉非替尼药物敏感性明显增加。流式细胞仪结果示JSI-124和吉非替尼共同处理H1975细胞后，其凋亡水平明显升高。3.不同浓度的STAT3特异性抑制剂JSI-124处理H1975细胞后，Westernblot和RT-PCR结果示伴随着磷酸化STAT3的蛋白水平和mRNA水平的减少，多药耐药蛋白MDR1的蛋白表达水平及mRNA表达水平也出现下降。研究结论1.耐吉非替尼的NSCLC细胞中STAT3信号通路是异常活化的，抑制该通路可逆转耐药细胞对化疗药物的耐药性、促进化疗药物诱导的凋亡。2.STAT3信号通路可通过调控多药耐药蛋白MDR（1P-GP）的表达，参与NSCLC细胞对吉非替尼的耐药机制。