背景:卡波氏肉瘤病毒（Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV）是一种γ2型疱疹病毒,基因组全长约140 kb,编码约90个开放阅读框（open reading frame,ORF）。其中,KSHV K13基因编码的病毒Fas相关死亡结构域白介素-1β转换酶抑制蛋白（viral Fas-associated death domain-like interleukin 1βconverting enzyme inhibitory protein,v FLIP）和K9基因编码的病毒干扰素调节因子1（viral interferon regulatory factor 1,v IRF1）已被证明能够调控多种信号通路促进KSHV相关肿瘤的发生与发展。目前,关于这两个致瘤蛋白的功能和机制研究大部分都借助于过表达系统,在KSHV全基因组中删除K13或K9是否影响KSHV诱导肿瘤形成的能力,以及其中涉及的分子机制等,至今仍不清楚。目的:构建缺失K13或K9基因的KSHV突变株,为后续进一步研究v FLIP或v IRF1功能提供有力工具。方法:利用E coli GS1783工程菌通过两步热重组法删除KSHV红-绿-蓝细菌人工染色体（red-green-blue-bacterial artificial chromosome,RGB-BAC16）中的K13或K9的编码区（coding sequence,CDS）序列进行突变质粒构建,并结合聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）、测序、酶切等方法对突变的质粒进行验证。将成功构建的突变质粒转染i SLK-puro细胞,运用潮霉素B进行细胞筛选,使细胞的荧光率达90%以上,获得稳定转染RGB-BAC16质粒的细胞。诱导i SLK细胞获得野生型或突变型的KSHV病毒,分别感染人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）,利用荧光实时定量PCR（real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR）、免疫印记（Western blot）或双荧光素酶报告等实验验证K13或K9基因缺失是否成功。结果:成功构建了缺失K13或K9 CDS区的KSHV突变质粒,以及稳定转染KSHV野生型或突变型质粒的i SLK细胞系。诱导i SLK细胞获得的KSHV野生型或突变型病毒能够成功感染HUVECs细胞。结论:本研究成功构建了KSHV K13或K9基因缺失突变株,有助于进一步研究致瘤蛋白v FLIP和v IRF1的功能及其中涉及的分子机制。