【摘 要】
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表面增强拉曼散射(SERS)具有克服传统拉曼光谱的局限性的优势,可以将标准拉曼强度提高9-14个数量级且有效地淬灭生物样品中常见的荧光。最近几年,SERS技术已经被很多的研究人员应用在生物与化学等领域上。醋酸纤维素(CA)膜具有孔隙大小均一、截留效果优良、化学性能稳定、过滤迅速等优势,目前已被广泛地应用于血清蛋白的分离与纯化。本文采用CA膜纯化血清蛋白与银纳米粒子表面增强拉曼光谱相结合的方法进行血
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表面增强拉曼散射(SERS)具有克服传统拉曼光谱的局限性的优势,可以将标准拉曼强度提高9-14个数量级且有效地淬灭生物样品中常见的荧光。最近几年,SERS技术已经被很多的研究人员应用在生物与化学等领域上。醋酸纤维素(CA)膜具有孔隙大小均一、截留效果优良、化学性能稳定、过滤迅速等优势,目前已被广泛地应用于血清蛋白的分离与纯化。本文采用CA膜纯化血清蛋白与银纳米粒子表面增强拉曼光谱相结合的方法进行血清蛋白的生化分析,旨在建立一种无创、无标记的癌症筛查方法。主要研究工作如下:将肝癌的血清样本用采样器涂抹在浸泡过的CA膜上,置于电泳槽内电泳,完成后将其中一条CA膜进行染色再漂洗。以染色的位置为参照,将未染色的CA膜剪下,然后加入冰醋酸,最后与银胶混匀,收集上清液进行SERS测量。分析肝癌血清蛋白与正常血清蛋白的谱峰,对比两者光谱的差异之处。采用主成分分析(PCA)方法降维,结合线性判别(LDA)分类,对分类结果做后验概率与受试者工作曲线以检验其准确性。检测结果显示肝癌样本与正常样本的特异性和灵敏度分别为96.7%、96.7%。在本研究中,鉴别肝癌与正常人的受试者工作特征曲线(ROC)下积分面积为0.994。由于膜电泳较为耗时,因此在本文中简化其步骤,以此达到更加快速、简便的筛查手段。首先将肝癌的血清样本与乳腺癌的血清样本涂抹在干燥的CA膜上,待其吸收后剪下,加入冰醋酸后与银胶进行混匀,收集上清液进行SERS测量。分别对肝癌血清蛋白与正常血清蛋白、乳腺癌蛋白与正常血清蛋白中光谱谱峰的含义进行分析,在分别对比肝癌血清样本与正常血清样本光谱、乳腺癌血清样本与正常血清样本的不同之处。结合PCA-LDA分析方法检测肝癌血清样本与正常血清样本的特异性、灵敏度分别为91.1%、95.2%,鉴别肝癌与正常人的ROC曲线下积分面积为0.971。采用偏最小二乘法支持向量机(PLS-SVM)诊断算法检测乳腺癌样本与正常样本的特异性和灵敏度分别为97.8%、90%,诊断准确率可达94.7%。这项探索性的研究表明,CA膜纯化血清蛋白与SERS技术相结合在癌症筛查方面拥有巨大的潜力。
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