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目的:呼吸节律产生的神经网络主要是在脑干,形成神经网络的关键神经元位于延髓。近年来ATP被认为可能是中枢和外周化学感受器信号传递中的关键递质或调质。本文观察ATP的嘌呤能受体(purinergicreceptors,P2)家族中P2X受体不同亚单位在新生和成年Sprague-Dawley(SD)大鼠延髓的表达。研究ATP及其P2X受体在新生SD大鼠延髓对呼吸活动的调节作用。
方法:实验用成年(6—8w)SD大鼠和新生(卜5d)SD大鼠各6只,雌雄不计,取延髓。用免疫组织化学的方法和图像分析技术,观察和比较ATP的P2X2和P2X4受体在新生和成年SD大鼠延髓的表达。取新生SD大鼠,用振动切片机切取延髓脑片,得到包含XII神经根的700-800μm厚的脑片,孵化后将脑片移入记录槽内,玻璃微电极吸附并记录XII神经根的放电活动;脑片灌流液中加入不同浓度的ATP,观察ATP对XⅡ神经根放电活动的影响;脑片灌流液中合并应用ATP和P2X受体的阻断剂Suramin及NF279,观察Suramin及NF279对ATP影响XII神经根放电活动的调节;用N295﹪+C025﹪气体饱和脑片灌流液,观察缺氧对xn神经根放电活动的影响;在缺氧同时灌流NF279,观察NF279对缺氧影响Xl/神经根放电活动的调节。
结果:(1)P2X2和P2x4的阳性神经元和阳性纤维在新生和成年SD大鼠的延髓都有广泛表达,主要分布在孤束核、XII颅神经核和延髓腹外侧区,延髓其他区域为散在的分布。成年鼠和新生鼠延髓的P2X2受体均比P2X4受体的表达水平高(P<0.01);在新生SD大鼠延髓,P2X2和P2X4受体的表达水平均比成年SD大鼠低(P<0.01)。(2)新生SD大鼠延髓脑片灌流液中加入ATP后,能使XII神经根放电活动快速增加,起效快,冲洗后作用迅速消失;ATP浓度分别在O.1Nvl、1μM、lOμM、100gM时,XII神经根的放电频率比对照状态明显增加,呈S形曲线,差别有统计学意义,分别为P<0.05、P<0.01、P<0.001、P<0.001;而XII神经根的放电幅度和放电积分面积因ATP浓度不同而改变不一,0.1gM低浓度时减小(P<0.05),1μM中等浓度时无明显影响(P>0.05),而lOμM和100μM高浓度时均增加(P<0.05,P<0.01)。(3)脑片灌流液中加入ATP的P2X受体阻断剂Suramin(3μM)后,观察到XII神经根放电频率、放电幅度和放电积分面积都减弱,与对照状态相比差别有统计学意义(P<0.05):脑片灌流液中合并加入Suramin(3pM)和ATP(10μM),观察到Suramin能部分抑制ATP对XII神经根放电频率、放电幅度和放电积分面积的增强作用(P<0.05);脑片灌流液中加入Suramin的类似物NF279(2μM),观察到XII神经根放电频率、放电幅度和放电积分面积也都减弱,与对照状态相比差别有统计学意义(P<0.05),而且,与Suramin相比减弱作用更明显:脑片灌流液中合并加入NF279(2μM)和ATP(10μM),观察到NF279几乎完全阻断ATP对XII神经根放电幅度和放电积分面积的增强作用(/>0.05),但不能完全阻断ATP对XⅡ神经根放电频率的增加作用(P<0.05)。(4)用N295﹪+C025﹪气体饱和脑片灌流液,灌流5min造成脑片缺氧,新生大鼠XII神经根放电活动在缺氧起初1.5min左右时间放电频率与对照相比明显加快(P<0.001),放电幅度和放电积分面积增加(P<0.05、P<0.01);然后XII神经根放电活动明显减慢;在缺氧同时灌流NF279(2gM)5min,xⅡ神经根放电频率、幅度和积分面积与对照相比也增加(/~0.001、P
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