小鼠嗅鞘细胞的免疫组化和分类鉴定

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脊髓损伤即使是局部的损伤也会造成严重的后果,可能造成局部永久性的瘫痪,严重影响患者的生活质量,也会给患者的家庭和社会带来严重的负担和损失。研究人员发现脊髓神经损伤后有可能通过细胞移植、基因治疗或者转基因细胞移植来修复。研究表明,在众多的移植修复中枢神经损伤的细胞候选者中,OECs被列为最为理想的一种细胞。OECs细胞膜上有与细胞黏附和促进神经再生有关的分子,这些分子可以为神经轴突的再生建立良好的内在环境,有助于受损轴突的伸长、生长,促进轴突向靶区延伸,帮助神经功能恢复。目前,有数据显示OECs可以促进小鼠坐骨神经再生,可以促进小鼠脊髓束半切模型的轴突延长生长等。现在,应用比较成熟的嗅鞘细胞体外培养方法是NASH差速贴壁法。NASH差速贴壁法主要是利用成纤维细胞、星形胶质细胞和成鞘细胞的贴壁时间不同而将它们分离开来。培养的OECs可表现出多种细胞形态和细胞表面标志。最常见的主要有两种,一种是类神经膜细胞型,表达p75NTR受体。主要分布于外周嗅神经系统内,呈纺锤形。种就是类星形胶质细胞型,主要分布在小鼠嗅球内,多数扁平。缺乏p75NTR受体,但GFAP成免疫阳性。我们利用GFAP免疫组化鉴定体外培养的嗅鞘细胞的纯化能力。本实验采用改良的NASH法差速贴壁和阿糖胞苷纯化培养小鼠嗅球原代嗅鞘细胞,利用GFAP鉴定了体外培养的细胞纯度。利用抗PSA-NCAM和抗L-NGFr两种抗体将培养的细胞分类,尝试研究OECs不同表型的关系,希望进一步发现不同株系OECs在细胞表达和物质分泌上的不同功能,最终应用于移植修复脊髓损伤和促进轴突再生的作用。
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