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目的:本研究通过体外分别培养大鼠卵巢颗粒细胞、成骨细胞与共同培养这两种细胞,测定与分析杜仲叶提取物对大鼠颗粒细胞产生雌激素的影响,进一步观察与分析颗粒细胞所产生的雌激素对成骨细胞分泌碱性磷酸酶(ALP)的影响,从细胞与分子水平探讨补肾健骨中药杜仲叶提取物对Ⅰ型骨质疏松症的防治机理,为保护女性运动员骨组织健康提供营养保健依据。方法:细胞水平研究——加入不同浓度的杜仲叶提取物于培养基中,进行大鼠卵巢颗粒细胞体外培养,作用48小时后,采用MTT法测定细胞增殖率,采用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay ,ELISA)测定各培养液中雌二醇(E2)的生成量。采用胶原酶消化法体外分离培养大鼠成骨细胞,取第三代成骨细胞进行培养,以颗粒细胞和成骨细胞数目比(2:1,1:2)直接混合培养,加入最适浓度的杜仲叶提取物,培养72小时,测定培养液中生成碱性磷酸酶(ALP)的量。分子水平研究——采用RT-PCR技术,分析测定杜仲叶提取物对成骨细胞表达护骨因子OPG量的影响。结果:用不同浓度的杜仲叶提取物分别作用于颗粒细胞48小时,杜仲叶提取物可增加颗粒细胞的增殖和雌二醇的生成量,随着浓度的降低,促进作用逐渐减弱,呈剂量依赖性关系。在10-5g/ml时与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。在成骨细胞和颗粒细胞的共同培养72小时后,颗粒细胞和成骨细胞数目比为1:2组效果明显,其中共同培养产生的碱性磷酸酶的浓度与相同数目单独培养的成骨细胞中直接加杜仲叶提取物产生的碱性磷酸酶浓度相比较,有显著性差异(P<0.05)。杜仲叶提取物可提高成骨细胞护骨因子OPG表达量。结论:杜仲叶提取物呈剂量依赖性地增加大鼠颗粒细胞雌二醇的生成量,同时在颗粒细胞和成骨细胞混合培养中,颗粒细胞产生的雌二醇又可以增加成骨细胞碱性磷酸酶的分泌,表明杜仲叶提取物除直接促进成骨细胞的生成外,还可通过对性腺的作用来增加体内雌激素的分泌促进成骨细胞的生成。因此杜仲叶提取物防治骨质疏松症是多靶点的;在分子水平上,通过促进成骨细胞表达护骨因子OPG而发挥防治骨质疏松症的作用。