论文部分内容阅读
本品取自木贼科植物木贼（Equisetum hiemale L.）干燥地上部位。收载于2015版《中国药典》,平,甘、苦。归肺、肝经。疏散风热,明目退翳。主治目昏多泪,肠风下血,外伤出血。主产于东北、华北、内蒙古等地区,是历史悠久的传统中药。黄酮类成分是木贼主要有效成分,本文对木贼总黄酮提取工艺进行研究,并对其肝损伤保护作用进行初步探索,对深入开发传统中药木贼的临床应用价值具有深远意义。将木贼去根烘干,粉碎过筛,备用。取适量细粉,一定条件下对乙醇浓度、提取时间、料液比进行单因素考察,采用Box-Behnken Design响应面优化法筛选木贼总黄酮最佳提取工艺,并进行抗氧化活性研究。结果表明,按1:25（g/mL）的比例加入70%乙醇,超声50 min后,得率为10.06%,此时,木贼总黄酮含量最高,为13.57 mg/g,与预测值吻合度高达98%,各因素对木贼总黄酮含量的影响为:乙醇浓度>提取时间>料液比。探究最佳工艺下所得总黄酮抗氧化活性,实验显示:以抗坏血酸为阳性对照,木贼总黄酮具有一定的还原能力,对羟自由基（·OH）、ABTS+·、DPPH·清除效果随黄酮浓度的增高而增强,对应IC50值分别为1.02±0.01、0.75±0.00和0.35±0.00 mg/mL。此研究为木贼总黄酮的提取,天然抗氧化剂的开发以及后续实验奠定基础。在前期实验基础上,取10 kg木贼细粉,按最佳工艺对木贼总黄酮进行提取,石油醚除脂后（181 g）,得826 g干粉,加适量蒸馏水最大程度溶解样品以作上样样品。采用D101大孔树脂柱对样品进行分离纯化,用5倍柱体积蒸馏水、30%、50%、70%、无水乙醇对其进行梯度洗脱。收集30%、50%、70%乙醇洗脱液,减压回收乙醇,冷冻干燥,得30%大孔树脂洗脱部位（EHLA）、50%大孔树脂洗脱部位（EHLB）、70%大孔树脂洗脱部位（EHLC）,对其进行黄酮类成分含量测定,并探究其抗氧化效果。结果表明,经D101大孔树脂纯化后,木贼黄酮含量由总提物的16.43%上升至EHLA、EHLB、EHLC的70.95、83.61、68.37%,由高到低为:EHLB>EHLA>EHLC。EHLA表现出较强的还原能力,EHLA、EHLB、EHLC对ABTS+·自由基清除能力的IC50值分别为:0.36、0.20、0.30 mg/mL,清除能力大小为:EHLB>EHLC>EHLA;对DPPH·的清除能力的IC50值分别为:0.06、0.02、0.14 mg/mL,清除能力大小为:EHLB>EHLA>EHLC。综合得率EHLB抗氧化能力最强,其次是EHLA。肝脏是机体重要代谢器官,对其起着不可替代作用。研究发现,应用广泛的解热镇痛药对乙酰氨基酚（简称APAP）对肝脏有一定程度的损害作用,安全剂量下的APAP发挥治病作用后经肾脏排出体外,而过量APAP则导致严重肝损伤甚至引发肝衰竭,本研究基于木贼总黄酮抗氧化以及黄酮类成分的抗炎作用,建立了APAP诱导的急性肝损伤模型,观察木EHLA、EHLB的护肝作用。结果表明,与模型组相比,给药组小鼠生长状况明显改善,两种药物均能显著降低小鼠血清ALT、AST水平,升高肝组织中MDA含量,不同程度地降低肝组织中SOD、GSH、GAH-Px含量,抑制TNF-α和IL-8含量的上。H&E染色及Western blot结果表明,给药组能缓解APAP引发的肝组织细胞凋亡。整体结果表明两种药物对APAP诱导的急性肝损伤均有保护作用,EHLB高剂量组效果较强,其机制可能与抑制脂质过氧化与氧化应激,缓解炎症反应及抗细胞凋亡有关。