论文部分内容阅读
禽白血病(Avian Leukosis,AL)是禽白血病病毒(Avian Leukosis virus,ALV)引起的严重影响养禽业发展的肿瘤性疾病,造成鸡群生长缓慢、蛋鸡产蛋率下降和免疫抑制,引起巨大经济损失和不良社会影响。ALV亚群较多,诱发的肿瘤表型复杂,一旦发生就难以控制和彻底根除。除了进行种鸡群的AL净化工作,应研发生物制剂降低或缓解ALV引发的不良影响。为此,本实验通过鸡胚卵黄囊接种重组ALV-FJ15HT0建立ALV先天感染鸡群模型,在进行疫苗接种时注射原核表达的融合三肽囊素(Bursin,BS),探究BS对ALV引发的生长抑制和免疫抑制作用的影响,为融合BS的临床应用提供科学的依据。方法:于SPF鸡胚7日龄(d)时卵黄囊接种3000 TCID50的ALV自然重组毒FJ15HT0以建立ALV先天性感染的动物模型,感染鸡群随机分为BS处理组与感染对照组,同时设立空白对照组、空白BS处理组。全部雏鸡出壳1 d和14 d时均以点眼滴鼻的方式接种鸡新城疫病毒(NDV)弱毒苗和以颈部皮下的方式免疫禽流感病毒(AIV)H5亚型灭活苗,免疫同时,两组BS处理组的雏鸡肌肉注射纯化浓缩后的BS 50 μg,两组对照组的全部雏鸡肌肉注射BL21菌液的超声上清纯化液。分别于雏鸡21 d、28 d、35 d和42 d时,采血分离血清检测各项指标,并统计分析BS处理对于先天性感染鸡群和非感染鸡群动物的体重、各组织器官指数、NDV和AIV-H5抗体滴度、血清细胞因子(IL-2、IL-4、IFN-γ)和抗体亚型(IgG1、IgG2)以及实验动物组织ALV gp85和CNTFRα表达量的分析;并对注射融合BS前1 d、注射后1 d、3 d和7 d的SPF鸡法氏囊进行转录组学分析。结果:(1)在鸡群1 d和14 d疫苗接种时,同时接种融合BS,可导致在各次接种BS后的14 d内,即7-28 d期间,垂直BS组鸡群体重与空白菌液组、空白BS组差异不显著(P>0.05),而在此期间,垂直菌液组实验动物体重与空白菌液组、空白BS组相比差异显著(P<0.05),证实BS可在一定的时效内缓解由ALV垂直感染导致的生长抑制,同时BS对于健康鸡群未表现出显著的促生长作用。(2)垂直BS组与垂直菌液组实验动物肝脏指数之间存在极显著差异(P<0.01),说明BS可缓解由ALV感染引发的肝脏肿大。(3)42 d时,垂直BS组NDV抗体滴度极显著高于垂直菌液组实验动物NDV抗体滴度(P<0.01),证实融合BS对ALV感染鸡群的NDV抗体有一定的维持作用。(4)35d和42 d时,融合BS接种可导致健康鸡群血清中AIV-H5抗体滴度显著升高(P<0.05),表明融合BS对健康鸡群AIV-H5抗体有维持作用。(5)融合BS对空白组鸡只血清中IL-2、IFN-γ的影响极显著(P<0.01),对先天感染ALV组鸡只血清中IL-2、IL-4和IFN-γ的影响不显著(P>0.05)。(6)42d时,空白BS组、垂直菌液组与空白菌液组鸡只血清中IgG1/IgG2之间均存在极显著差异(P<0.01)。(7)转录组分析发现,融合BS涉及了 PPAR、MAPK等信号通路,其中会引起MAPK通路中MAPK11基因的极显著下调(P<0.01)。(8)BS接种可显著降低感染动物胸腺、肾脏及法氏囊组织中gp85表达量(P<0.05),极显著降低法氏囊组织中gp85表达量(P<0.01);在肝脏组织中,空白菌液组CNTFRα表达量是空白BS组CNTFRα表达量的3.7倍;在胸腺组织中,垂直菌液组CNTFRα表达量是垂直BS组CNTFRα表达量的2.58倍。结论:融合BS可时效性提高ALV感染动物的增重效率,提高健康动物针对灭活苗的抗体滴度,增加ALV感染动物针对弱毒苗的抗体峰值维持时间,可抑制多种组织中ALV复制,因此其具备成为饲料添加剂和免疫调节剂的价值。