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目的：虫草菌胞内多糖的提取纯化以及多糖抗氧化活性的体外测定。
方法：对虫草菌丝体fungus G1进行发酵，收集菌丝体，提取虫草菌丝体粗多糖，通过阴离子交换和分子排阻法纯化得到多糖APS。建立H2O2诱导大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞PC12细胞氧化损伤模型，通过MTT比色法和胞外LDH酶活测定，检测APS对H2O2诱导PC12细胞损伤的影响。通过比色法检测PC12细胞胞内抗氧化酶过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)酶活以及MDA含量。采用荧光探针DCFH-DA和Fura-2 AM分别检测APS对氧化损伤下细胞内ROS和Ca2+水平的影响。RT-PCR方法检测多糖作用后胞内血红素氧合酶-1(HO-1)表达量。
结果：通过水提醇沉法得到虫草菌粗多糖，经过离子交换层析盐梯度洗脱分别得到中性多糖组分和酸性多糖组分(APSF)，APSF经过凝胶层析进一步纯化得到APS。MTT比色法检测结果表明APS可以显著提高氧化应激下PC12的存活率，当浓度为200μg/mL时，细胞的存活率比模型组提高26.6％。胞外LDH酶活测定实验显示，APS降低了H2O2对PC12细胞的损伤。胞内抗氧化酶活力及MDA含量检测，显示APS可以显著提高胞内CAT、SOD、GSH-Px酶活性，降低因H2O2损伤产生的MDA含量，并呈剂量依赖性。通过使用荧光探针DCFH-DA和Fura-2 AM检测胞内ROS和Ca2+水平，发现在100μg/ml、200μg/ml浓度下，APS显著降低氧化应激状态下PC12细胞胞内的ROS和Ca2+水平。RT-PCR检测表明APS作用PC12细胞24h后，胞内HO-1 mRNA表达量显著增加。
结论：APS可以明显降低由H2O2诱导的PC12细胞损伤作用，其作用机理可能与通过提高胞内抗氧化酶活性从而清除氧化应激状态下过量ROS有关。