糖尿病大鼠心肌胆固醇转出相关基因mRNA表达变化的研究

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糖尿病是严重的糖脂代谢紊乱性疾病。脂代谢紊乱是糖尿病并发症的重要原因。过氧化酶体增殖物活化受体α(PPARα)在心肌中表达丰富,是调节脂肪酸分解代谢的重要的核转录因子。糖尿病时由于胰岛素缺乏和(或)胰岛素抵抗,机体脂肪动员增加。由于脂肪酸的增加,使心肌细胞PPARα慢性激活,PPARα所调控的脂肪酸摄取、转运及氧化的基因表达增加,致使糖尿病心肌细胞几乎全部通过脂肪酸β-氧化提供能量。但是随着糖尿病病程的发展,糖尿病心肌细胞的脂肪酸的摄取速度超过了氧化速度,导致脂肪酸在心肌的沉积。目前认为,这是糖尿病心肌病发病的分子机理之一。 目的: 1、观察糖尿病大鼠心肌PPARα活性及表达改变的同时,观察LXRα及其下游基因ABCA1的表达以及胆固醇水平的变化。 2、给予大鼠菲诺贝特类药,观察糖尿病大鼠心肌PPARα激活或表达的情况,以及上述胆固醇代谢相关基因的表达情况。从胆固醇代谢的角度探讨糖尿病心肌脂代谢紊乱的分子机理。 方法: 1.糖尿病大鼠模型制备。禁食 12h 后,糖尿病各组大鼠一次性腹腔注射 2% STZ65mg/kg,注射后72h,尾静脉采血测定禁食6h后的空腹血糖,血糖浓度大于16.7mmol/L的大鼠确定为糖尿病大鼠。正常各组大鼠腹腔注射等量柠檬酸钠缓冲液。 2.动物分组及取材。将10周龄成年雄性Wistar大鼠,随机分为6组。①对照组(CON组):②糖尿病6周组(6DM组/CON2组):糖尿病模型成功后6周处死;③糖尿病12周组(12DM组):糖尿病模型成功后12周处死;④糖尿病17周组(17DM组):糖尿病模型成功后17周处死。⑤糖尿病6周给药组(DM+F组):糖尿病模型成功4周后用菲诺贝特灌胃(100 mg/kg/day) 2周至第6周处死;⑥对照给药组(CON+F组):与⑤同时处死,处死前连续用菲诺贝特灌胃(100 mg/kg/day) 2周;大鼠禁食一夜后处死,颈动脉采血,血清用于血清葡萄糖测定。心脏用于RNA及心肌总脂提取。 3.心肌总脂提取:参照文献提取心肌总脂,用于胆固醇测定。 4.心肌胆固醇及血清葡萄糖测定用全自动生化分析仪,酶法测定。 5.心肌总RNA的提取,鉴定及定量。用Trizol法提取总RNA,电泳鉴定,根据OD<,260>定量总RNA浓度。 6.mRNA的定量用GAPDH作为内参照,利用RT-PCR法测定心肌PPARα-mRNA,ACO-mRNA,LXRα-mRNA,ABCA1-mRNA的相对表达量。 结论: 1.虽然在糖尿病发展至17周末时大鼠心肌胆固醇含量没有变化,但参与胆固醇代谢的基因表达发生了变化,PPARα不仅调控脂肪酸代谢还与胆固醇代谢有关。 2.糖尿病心肌PPARα调节条件发生了变化。菲诺贝特既不能激活糖尿病心肌PPARα,也不能影响胆固醇代谢相关基因LXRα及ABCA1的表达。
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