目的：急性运动性轴索型神经病(acute motor axonal neuropathy, AMAN)是格林-巴利综合征（Guillain-Barre syndrome,GBS）的一种亚型，在我国华北地区发病率较高。其临床特点是运动功能受损明显，而感觉功能大多正常，一般病情重，多有呼吸肌受累，24-48小时内迅速四肢瘫，肌萎缩出现早，病残率高，预后差。病理改变为前根和周围运动神经轴索变性，轻度脱髓鞘，病灶中炎性细胞浸润少见。目前AMAN的病因及发病机制尚未确切阐明。AMAN与急性炎性脱髓鞘性多发性神经病(acute inflammatory demyelinating polyneuropathy,AIDP)不同，因为AIDP已具有公认的动物模型，即实验性自身免疫性神经病（experimental autoimmune neuropathy,EAN）,可用牛P2蛋白免疫Lewis大鼠诱发，其病理及临床所见与AIDP相似，且病残率高可重复性强。而关于AMAN动物模型的研究有很多，其中本实验室曾用空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni，Cj） 免疫鸡使部分鸡发生类似AMAN病人的瘫痪，这个模型在国际上引起重视。但是上述模型发病率较低，用于进一步研究的实用价值有限，这促使我们进一步研究建立发病率高且可重复性强的AMAN动物模型的方法。神经节苷脂是一族酸性糖脂，它们由脂质与碳水化合物两大部分组成，是哺乳动物神经细胞膜的主要成分<WP=4>之一，在脑内GM1,GD1a,GD1b,GT1b这四种神经节苷脂含量丰富，其中以GM1最多，神经系统外含量甚少。大量文献报道10-42%的GBS病人血清中含有抗神经节苷脂抗体，尤其是抗-GM1抗体。有作者用GM1抗体阳性的多发性运动性神经病（multifocal motor neuropathy,MMN）患者血清注入鼠的坐骨神经，引发了传导阻滞并发现在郎飞结处有免疫球蛋白沉积；另外也有用GD1b免疫日本大耳白兔引发感觉性轴索型神经病的报道。这使我们认识到神经节苷脂及其抗体在GBS发病中可能起重要作用。因此本研究探讨应用神经节苷脂免疫实验动物建立AMAN动物模型的方法。材料与方法：选择日本大耳白兔作为实验动物，应用牛脑神经节苷脂（Bovine Brain Gangliosides,BBG）或神经节苷脂GM1作为免疫原，与Keyhole Limpets Hemocyanin (KLH)，弗氏完全佐剂（Freund’s Complete Adjuvant ，FCA）一起于背部皮下及腹腔内两个部位注射以免疫动物，每3周1次，直至动物出现瘫痪或首次免疫后6个月仍无任何临床症状。在动物出现肢体无力后，根据其病情严重程度，于当天或发病后20天内将其处死，原则是在动物自然死亡前取材。将符合上述条件的实验动物经心脏取血处死，迅速取其左右坐骨神经，左右臂丛神经及部分脊髓的前后根，经修整后置入4%多聚甲醛固定液中。固定24小时后，可取出经磷酸盐缓冲液（PBS，PH7.4）冲洗，浸入0.5%锇酸中振荡染色1.5小时后，再用PBS（PH7.4）冲洗，之后经33%，66%，100%甘油系列脱水后可保存于100%甘油中以备分离神<WP=5>经单丝，观察神经变性情况。另外，在实验过程中，每周经耳静脉取血1次，放入EDTA抗凝管，轻轻摇匀经离心可得血浆，将其分装，置-25℃保存。本实验应用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测血浆中抗-GM1 IgG抗体。首先将抗原GM1包被于96孔酶标板上（GM1 250 ng/100 μl无水乙醇），在室温下蒸发干燥，之后每孔加200μl 1%牛血清白蛋白-磷酸盐缓冲液（1%BSA-PBS，PH 7.4），室温孵育2小时，PBS洗板5次，加100μl待测血浆（用1%BSA-PBS以1：500稀释，并行两孔），置4℃过夜。PBS洗板5次，空干后加HRP标记的羊抗兔IgG作为二抗（以1%BSA-PBS 1：2000稀释），每孔100μl，室温孵育2小时。PBS洗板5次，加底物（10ml基质液中含4mg邻苯二胺和5μl 30%H2O2 ）100μl作用30分钟后终止反应。在492nm处用酶标仪（anthos labtec 2010）测吸光度A值。并行两孔A值的均值为最后实测值。1%BSA-PBS做空白对照。如果空白对照A值>0.2，重复实验。血浆样品孔OD值减去空白对照A值后≥0.1者为阳性，差值<0者按0计算。A值结果分析采用方差分析中的Dunch新法以首次免疫前取得的血浆样品为对照，分别与首次免疫后每周取得的血浆样品中的吸光度A值进行统计学比较。结果：BBG免疫的5只兔在首次免疫后第62-144天开始发病，出现程度不等的肢体无力，且发病后病情进展较迅速，尤其是兔R-1，R-3，发病后当天即出现四肢迟缓性瘫痪，头不能抬起，且呼吸困难；GM1免疫的6只兔中有5只兔发生瘫痪，其发病距首次免疫的时间较<WP=6>BBG组短。在免疫过程中，兔R-2，r-1在首次免疫后1周即出现腹泻，但之后逐渐好转。所观察实验兔在发病前后体重变化不明显。病理分离神经单丝显示兔R-1，R-5坐骨神经、臂丛神经或脊髓的前根中出现轻至重度的类Wallerian变性，其中典型类Wallerian变性显示神经单丝髓鞘破坏崩解成数量不等的卵原形，未见节段性的髓鞘脱失，轻者可见神经单丝粗细不等，髓鞘较完整，变性神经单丝在整束神经中所占比例分别为35%、40%；兔r-2、r-4和r-6的坐骨神经、臂丛神经或脊髓的前根中可见轻至中度的类Wallerian变性，变性神经单丝所占比例分别为9%、11%、5%；兔r-6坐骨神经中可偶见神经再生。ELISA法检测兔血浆抗体示：血浆中抗-GM1 IgG抗体滴度自第3-15周开始增高并持续，且所测A值在达峰