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目的:外泌体(Exosomes)是介导细胞间信息交流的又一新的载体,其介导的细胞间信息传递在免疫反应、炎症和肿瘤等过程中发挥重要作用。本实验拟分离、鉴定幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)诱导的人胃癌SGC-7901细胞源性外泌体,使用miRNA芯片筛选其中差异表达微小RNA(microRNA,miRNA),通过生物信息学分析其潜在的靶基因及可能参与的信号通路,为进一步阐明H.pylori的致癌机制提供新线索。方法:使用H.pylori活菌体外刺激人胃癌SGC-7901细胞24h,以空白处理组为对照,采用超高速离心法和外泌体提取试剂盒提取两组细胞释放的外泌体,并采用透射电子显微镜、纳米粒子跟踪分析和Western-blot蛋白印迹实验进行鉴定;荧光染料PKH67标记外泌体,与THP-1源性巨噬细胞共孵育,共聚焦显微镜下观察巨噬细胞摄入外泌体的情况;采用microRNA基因芯片对两组细胞外泌体中含有的miRNA的表达谱进行差异分析,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对其中四个差异表达miRNA进行验证;生物信息学软件mirdbv6和targetscan7.1预测部分差异表达miRNA(上调30个、下调20个)结合的靶基因,GO功能注释和KEGG生物学途径富集分析这些靶基因的功能及可能参与的信号通路。结果:1.纳米粒子跟踪分析结果表明分离的外泌体直径在137.1nm左右,透射电镜观察到外泌体直径为50-150nm的具有双层膜结构的囊泡;2.Western-blot实验发现CD9、CD63、TSG101在外泌体中的表达高于在SGC-7901细胞中的表达,而内质网蛋白Calnexin在外泌体中不表达,在细胞中表达;3.外泌体与THP-1巨噬细胞共孵育12h后被细胞内吞;4.与对照组相比,H.pylori刺激组表达上调的miRNA共有130个,表达下调的miRNA共有111个;5.GO功能注释和KEGG Pathway分析表明,部分差异表达miRNA预测的靶基因主要调节RNA代谢、RNA聚合酶II的转录、细胞代谢和蛋白质结合,参与了PI3K-AKT、NF-κB、JAK-STAT、干细胞多能性等炎症和肿瘤相关通路的调节。结论:.H.pylori处理导致SGC-7901细胞外泌体miRNA表达水平发生显著改变,生物信息学预测这些差异表达miRNA的靶基因产物在炎症和肿瘤相关信号通路调节中发挥重要作用。