口蹄疫（Foot-and-Mouth Disease, FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth Disease Virus, FMDV）引起的偶蹄动物感染的一种烈性传染病，该病的发生和流行严重危害畜牧业的持续健康发展，因此，世界各国非常重视对该病的研究。本研究根据FMDV的基因组核苷酸序列设计并合成了数对反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）的寡核苷酸引物。利用3′-RACE方法从OH/99株细胞传代毒中扩增得到一7300bp片段，同时，采用常规RT-PCR技术扩增得到其5′-非翻译区（5′-untranslated region, 5′-UTR）的S片段和内部核糖体进入位点序列（internal ribosome entry site, IRES），分别克隆至pGEM-T Easy 载体中进行序列测定。应用连接PCR的方法将15bp poly（C）序列插入S和IRES两片段之间，并将连接片段插入pBluescript SK，然后将7300bp片段从pGEM-T Easy载体上切下，插入重组体pBluescript SK中，构建了OH/99株全长cDNA。以全长cDNA重组质粒为模板进行全长PCR扩增，PCR产物经NdeⅠ消化后，利用噬菌体T7启动子聚合酶系统启始合成RNA转录本，借助脂质体将RNA转录本转染BHK-21细胞。转染细胞连续传3代后出现典型的细胞病变，通过RT-PCR和电子显微镜观察均确证了感染性病毒粒子的产生。将此基因工程毒接种乳鼠后出现了典型的临床症状，进一步说明了FMDV OH/99 株感染性克隆构建成功。本研究为FMDV 基因组结构和功能的研究奠定了良好的基础，也为新型疫苗的研究提供了非常有用的工具。