苍术挥发油指纹图谱研究及2株真菌对茅苍术组培苗的影响

来源 :南京师范大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:zjamoy
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近年来,国际市场对苍术的需求量日益增加,但苍术道地产区茅山的植物资源和生态环境严重遭到破坏,加之茅苍术在野生条件下自身繁殖能力低等原因,造成道地苍术资源枯竭,使其濒临灭绝,越来越多的非道地苍术在市场上流通,因此评价不同产地苍术的质量,研究道地和非道地苍术的区别及关系,建立苍术的质量评价体系,确保苍术的临床疗效十分必要。在本研究中,使用硅胶层析法,分离苍术的4种活性成分:苍术酮、茅术醇、β-桉叶油醇、苍术素。在石油醚:乙酸乙酯(95:5)展层,对二氨基苯甲醛显色条件下,苍术酮显紫红色,Rf值为0.82,分子量216.33;苍术素加热后显绿色,Rf值为0.67,分子量182.23;茅术醇加热后显蓝色斑点,Rf值为0.23,分子量222.37;β-桉叶油醇加热后显蓝色斑点,Rf值为0.24,分子量222.37。根据色谱、质谱和核磁数据确定结构,并利用峰面积归一化法进行纯度检查,4种化合物的纯度均达98%以上。然后使用连接有氢火焰离子化检测器的气相色谱(GC-FID)建立了苍术指纹图谱结合多指标定量的质量评价方法,苍术中6个主要成分,α-蒎烯、α-水芹烯、苍术酮、茅术醇、β3-桉叶油醇、苍术素被带入到多指标定量中。方法学考察结果表明我们建立的方法有较高的精密性,稳定性,重复性和准确性。随后,利用建立的方法对20批不同产地的苍术进行指纹图谱分析和多指标测定,相似度评价的结果表明不同产区苍术指纹图谱差别很大,其中来自湖北英山(苍术规范化种植基地)和江苏茅山(苍术传统道地产区)的苍术指纹图谱只有0.56的相似度,6种主要物质的定量结果表明英山苍术各物质间较为平均,茅山苍术中苍术酮是主要成分。另外,本论文还对20批药材的指纹图谱信息进行了系统聚类分析,结果表明茅山南苍术与关苍术有较为密切的关系。由于历代中药学著作都很重视药材的产地,根据聚类分析和6种主要物质定量的结果,使用典型判别分析,建立了苍术产区判别模型,经过验证该模型是可靠的。最后本论文研究了苍术致病性尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum 和体外与其拮抗的非致病性镰刀菌(Fusarium spp.),对茅苍术组培苗挥发性成分和部分酶活力的影响。对叶片酶活性和根部挥发性成分连续观测后发现,茅术醇、β-桉叶油醇、苍术酮这3种物质并非是茅苍术组培苗中的主要成分。在同时接种2株真菌的处理组中,酶活性和挥发性成分的变化较大,PAL酶和PPO酶在接种第2天达到峰值,CAT酶SOD酶在第4天达到峰值,挥发油积累在第2天达到峰值,随后酶活性和挥发性成分迅速降低。拮抗微生物的存在刺激了酶活性的提升,并在初期带来了挥发性成分的积累,但在本实验中,酶活性的提高和挥发性成分的积累都是不持续的。本论文围绕草本药物品质的客观科学评价问题,开展苍术活性成分分离、不同产地苍术色谱指纹图谱分析、病原菌感染对茅苍术组培苗挥发性成分及酶活的影响的工作。对苍术活性物质研究有较好的应用价值,为客观评价苍术质量提供了一种标准化的参考,对苍术的种植、品质的提升、病原菌的防治具有一定的指导意义。
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