核桃青皮PPO的分离纯化及部分酶学性质研究

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多酚氧化酶是一种末端氧化酶,普遍存在于植物体内的非线粒体中。新鲜水果、蔬菜容易发生褐变,主要和其体内的多酚氧化酶有关。核桃青皮作为核桃生产中的副产品,利用的非常少,我国的核桃生产量大,所以其青皮的产量也高,如果不加以利用,一方面是对资源的浪费,另一方面也会对环境造成污染。因此本文以核桃青皮为研究对象,用丙酮沉淀、金属螯合亲和层析的方法对核桃青皮PPO进行分离纯化,通过Native-PAGE电泳进行纯度鉴定;同时对核桃青皮PPO的部分酶学性质进行研究,以期为核桃青皮的回收利用提供理论依据,主要研究结果如下:1.确定了核桃青皮PPO粗酶液的最佳提取条件:PVP添加量为1.0%,提取时间4h,料液比为1:3;影响核桃青皮PPO粗酶液提取率的主要因素是提取时间,其次是PVP添加量。2.核桃青皮PPO经过丙酮沉淀、金属螯合亲和层析后,纯化了1.42倍,回收率为0.23%。通过Native-PAGE电泳的方法对提纯的PPO进行纯度鉴定,发现核桃青皮PPO有3种同工酶。3.对核桃青皮PPO的酶学性质进行了初步研究。以邻苯二酚为底物,研究了pH、温度、抑制剂、Cu2+对其活性的影响以及PPO的热稳定性等。研究结果显示,核桃青皮PPO的最适pH是6.0,最适温度是20℃,抗坏血酸对其抑制作用比较显著;亚硫酸氢钠和柠檬酸对核桃青皮PPO的活性也有抑制作用,前者的抑制作用强于后者,当浓度小于10mmol/L的时候,柠檬酸对PPO几乎没有抑制效果。铜离子只有在一定的浓度范围内,才对PPO有激活作用,超过了这个范围,铜离子对PPO反而有抑制作用。
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